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水产种苗中氯霉素残留量测定前处理方法改进 　　摘要：本文对气相色谱法测定水产种苗中氯霉素的各种影响因素进行探讨，分析了样品提取和脱脂净化过程对检测结果的影响，并对上述环节进行改进。结果表明：改进后的前处理，实验成本低，加快实验速度，提高了回收率，适用于批量样品同时检测工作的需要。 　　关键词：氯霉素；水产品；气相色谱；前处理 　　中图分类号：0657.7 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20161232003 　　氯霉素（chloramphenicol）是由委内瑞拉链丝菌产生的抗生素。属抑菌性广谱抗生素，被广泛用于治疗各种敏感菌感染，故此在水产养殖业中被得到广泛应用。但由于氯霉素能抑制骨髓造血功能，造成过敏反应，引起再生障碍性贫血（包括白细胞减少、红细胞减少、血小板减少等），此外还可引起肠道菌群失调及抑制抗体形成）等危害，严重威胁人体健康，已成为人类的隐形杀手。因此对于???产养殖药物残留的检测尤见重要。目前对于氯霉素药物残留的检测方法，主要有GC法、酶联免疫法（ELISA）、负化学源GC-MS测定法、LC法、超高效液相法、LC-MS-MS法、微生物法、放射免疫法等。目前检测机构主要采用气相色谱法，但由于其样品前处理过程繁琐复杂，耗时长，易出现回收率偏低的情况，对于批量样品的检测，尤见不合适。为此本文根据实际检测工作，在行业标准DB44/T 543 2008的基础上，探讨并改进了提取、萃取等影响检测的环节，对前处理进行简化，进一步提高方法的回收率和简化前处理步骤，节省测定时间和成本，进一步优化各个要素，提高了回收率和工作效率。 　　1材料与方法 　　1.1标准品与试剂 　　氯霉素标准品，纯度≥98.5%（德国Dr.EhrenstorferGmbH公司）；甲醇、乙酸乙酯，正己烷均为色谱纯（美国Fisher scientific飞世尔实验器材（上海）有限公司）；试验用水为超纯水（东莞市怡丰贸易有限公司），18.2MΩ.cm；无水硫酸钠为分析纯（在马弗炉中650℃灼烧4h，冷却后置干燥器内中备用）；氯化钠为优级纯（汕基金项目：东莞市科技计划资助项目（项目编号：K10017K）头市西陇化工有限公司）；衍生化试剂：BSTFA/TMCS体积比为99：1（美国Supelco公司），Milli-Q超纯水系统（美国Millipore公司）。 　　1.2仪器与设备 　　气相色谱7890（美国安捷伦公司）；离心机（德国SIGMA公司）；电子天平：感量0.0001；MS1涡旋振荡器（德国IKA公司）；KQ-300VDE型超声波提取仪（昆山市超声仪器有限公司），氮吹仪（美国），超纯水仪（美??Millipore公司）。 　　1.3实验方法 　　1.3.1样品提取 　　准确称取均质水产种苗样品1.00g于15mL聚四氟乙烯离心管中，加入5mL乙酸乙酯，旋涡混合器混合30s，超声10min，4000ffmin离心3min。将乙酸乙酯层转移到50mL聚四氟乙烯离心管中，再重复提取1次，合并乙酸乙酯提取液于50mL聚四氟乙烯离心管中，于50～55℃水浴中吹氮蒸发至近干。 　　1.3.2脱脂净化 　　向离心管中加0.5 mL甲醇旋涡混合溶解残留物，加10 mL正已烷和10mL 4%氯化钠溶液，旋涡混合1.5min，充分混合提取脂肪，4000r/min离心3min，弃去正已烷相。水相中加入7mL乙酸乙酯，旋涡混合器混合1.5min，4000r/min离心3min，吸取乙酸乙酯层，经过无水硫酸钠柱脱水过滤于15mL具塞玻璃离心管中，再重复提取1次，用洗耳球挤压无水硫酸钠柱，在50-55℃水浴中吹氮蒸发至干。 　　1.3.3衍生化 　　向干的残留物中加100μL衍生物试剂，盖塞并旋涡混合10s，在70℃烘箱中反应30min。再在50～55℃水浴中，用氮气吹走多余的试剂，至样品管刚好吹干为止（注意：此步过长的吹干时间可导致丢失分析物）。加入1mL正已烷，旋涡混合10s，供气相色谱分析用。 　　1.4气相色谱测定 　　1.4.1气相色谱测定条件 　　色谱柱：HP-5石英毛细管柱（30m×0320mm×025gm），进样量1μL。脉冲不分流进样，脉冲压力为30psi，脉冲时间为0.75min。升温程序为：初温200℃，保持1min；20℃/min至250℃，保持10min，然后设定15℃/min升至280℃，保持2min。进样口温度26012，检测器温度为300～C。载气为氮气，流速1.2mL/min。外标法定量。 　　1.4.2标准溶液的配制 　　精确称取氯霉素标准品0.0250g，用甲醇溶解后定容到50mL容量瓶中，配制成500ug/mL的标准溶液，于冰箱冷藏储存。使用前根据需要稀释成不同浓度。 　　2