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菌落总数测定 举例 例次 稀释度及菌落数 菌落总数 报告方式 10-1 10-2 10-3 1 1365 164 20 16400 16 000或1.6×104 2 2760 295 46 31000 31 000或3.1×104 3 2890 271 60 30091 30 000或3.0×104 4 多不可计 4560 513 513000 513000或5.1×105 5 27 11 5 270 270 或2.7×102 6 0 0 0 ≤1×10 ≤10 7 多不可计 305 12 30500 31 000或3.1×104 例3：2个连续稀释度菌落数在30-300之间： 菌落总数=（295 ×2+46 ×2） ÷{（2+0.1 ×2） × 10-2 ）}=31000 混匀 36 ±1 ℃ ，18-24h 36 ±1 ℃ ，24 ±2h 搅 拌 固体产品 液体产品 225ml稀释液（0.85%生理盐水） 25g 25ml 乳糖胆盐发酵管 产气 不产气 报告 大肠菌群阴性 革兰氏染色 乳糖复发酵管 伊红美蓝琼脂平板 不产气 报告 大肠菌群阴性 产气 报告 大肠菌群阳性 革兰氏阴性无芽孢杆菌 革兰氏阳性 报告 大肠菌群阳性 36 ±1 ℃ ，24 ±2h 混匀 大肠菌群测定 大肠菌群测定 注意事项 2003版本的大肠菌群测定法采用三步法（初发酵、分离培养和证实试验）。 第一步初发酵是样品发酵的结果，不是纯菌的发酵试验。所以初发酵产气阳性管，经过后面两步法后，可能为阴性。很多实验证明，初发酵产气管，第三步证实试验后可能为阴性。 在伊红美蓝培养基上，要挑取典型、正确的菌落，故需熟悉大肠菌群在伊红美蓝上的菌落形态（如呈紫黑色有或无金属光泽、中心色较深的菌落） 在初发酵管中，产气量的大小与大肠菌群的检出率呈正相关，有时候套管内无气体，但是在液面或管壁有小气泡缓缓上升，此时我们可以用手轻敲或摇动试管，如果出现有气泡上升，应列为可疑阳性，做进一步的证实试验。 初发酵中出现产酸变色无产气现象，大量试验证明，可能做进一步的证实试验后为大肠菌群阳性。做证实试验时应考虑在内。 大肠菌群测定 MPN检索表部分截图如下： MPN表只提供3个稀释度，即： 1ml(g) 、0.1ml(g) 、0.01ml(g)；若改用10ml(g) 、1ml(g) 、0.1ml(g)，则表内数字相应增加10倍。其他同理类推。 MPN表中提供的稀释度是指原样品的量，而非稀释后的浓度，对固体样品要更加注意。如固体样品1g放入9ml的生理盐水（10倍稀释）后，虽加入1ml量样品稀释液，但实际其中只含0.1g样品，应按0.1g计。 按相应的浓度产生的阳性管，对应MPN检索表，查的在95%可信度下的大肠菌群最可能数量为？MPN/100g。 举例： 1ml(g)无阳性管 、0.1ml(g)无阳性管 、0.01ml(g)出现一支阳性管， 查上表（MPN检索表）得出该样品的大肠菌群为30MPN/100g。 9 管 法 大肠菌群最可能数(MPN)检索表 阳性管数 MPN 100ml(g) 95%可信限 1ml(g)×3 0.1ml(g)×3 0.01ml(g)×3 下限 上限 0 0 0 ＜30 　 　 0 0 1 30 ＜5 90 0 0 2 60 　 　 0 0 3 90 　 　 0 1 0 30 ＜5 130 霉菌、酵母菌测定 搅 拌 1ml 1ml 1ml 稀释度0.1 稀释度0.01 固体产品 液体产品 225ml稀释液（0.85%生理盐水） 25g 25ml 9ml稀释液（0.85%生理盐水） 每个稀释度2个平皿 每皿加入15-20ml马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红培养基 菌落计数 28±1 ℃ ，5d 混匀、凝固后倒放 报告 霉菌、酵母菌测定 注意事项 霉菌、酵母菌的检测方法与菌落总数的检测方法大体一样，仅培养基与培养条件不同。 霉菌、酵母菌的培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基、孟加拉红培养基。 培养条件为28 ±1 ℃ ，5d 。 平板培养方法得出的菌落总数，单位与菌落总数一致，皆为cfu/g。 挑选菌落总数在10-150cfu之间的平板计数。 若所有平板菌落数＞150cfu，则对稀释度最高的进行计数，取其平均菌落数。其余记为“多不可计”。 若所有平板菌落数＜10cfu，则对稀释度最低的进行计数，取其平均菌落数。 报告形式与菌落总数同理。 环境微生物监控项目 生产工序监控： 人员手、台面、空间环境-----GB15979 一次性使用卫生用品卫生标准 生产水质-----GB5749 生活饮用水卫生标准 产品监控： 饼干-----GB7100 饼干卫生标准 月饼-----GB7099 糕点、面包卫生标准 微生物检测限值对照 检测项目 内控标准限值(可