云南省食品安全地方标准《食品中展青霉素的测定-液相色谱串联质谱法》征求意见稿.docVIP

DBS FORMTEXT 53 FORMTEXT 云南省食品安全地方标准 DBS FORMTEXT XX/ FORMTEXT XXXXX— FORMTEXT XXXX FORMTEXT FORMTEXT 食品中展青霉素的测定 液相色谱-串联质谱法 FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX发布 FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX实施 FORMTEXT 云南省卫生厅发布 DBXX/ XXXXX—XXXX PAGE \* MERGEFORMAT 6 前言 本标准为首次发布。 食品中展青霉素的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准适用于食品（果汁饮料、果酒、果酱、果干及薯类制品等）中展青霉素的测定和确证。 规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 原理 澄清液体样品（果酒样品需出去乙醇）直接固相萃取净化；混浊液体样品和固体样品先用果胶酶水解，再以乙酸乙酯提取，吹干浓缩后固相萃取净化，液相色谱-质谱/质谱法测定，外标法定量。 试剂 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，试验用水为GB/T 6682规定的一级水。 乙腈（色谱纯）。 甲醇（色谱纯）。 冰乙酸。 乙酸乙酯（色谱纯）。 果胶酶溶液：活度不低于1300 U/mL（果胶酶固体则需按活度配制为溶液）。 0.2%乙酸溶液：量取2 mL冰乙酸以水定容于1000 mL容量瓶。 展青霉素标准品（patulin）：CAS编号149-29-1，纯度大于99.0%。 展青霉素标准储备溶液：准确称取适量的展青霉素标准品，用乙酸乙酯配成200 μg/mL的标准储备溶液，避光于-18℃下保存，稳定期1个月。 展青霉素标准中间溶液：准确移取适量的展青霉素标准储备溶液，用氮气吹干后，用0.2%乙酸（4.7）配成2 μg/mL的标准中间溶液，避光于4℃下保存，即用即配。 标准工作溶液：以相应的空白样品为基质，加入相应浓度的标准中间液，配制成1.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L标准溶液，同样品一同进行前处理及上机检测，并绘制标准曲线。 固相萃取小柱：Osais HLB或相当者，3 mL/60 mg。使用前对固相萃取柱依次加入3 mL水、3 mL甲醇和3 mL水活化，流速控制在每秒2滴~3滴。 仪器 液相色谱串联四级杆质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。 电子天平：感量0.1 mg，感量0.01 g。 漩涡混匀器。 高速离心机。 搅拌式均质机。 氮气吹干仪。 恒温空气浴（水浴）振荡器。 分析步骤 试样处理 澄清液体样品 取2 g试样（精确到0.01 g）于已活化的固相萃取柱上，用2 mL乙酸溶液（4.6）淋洗，流速为每秒1滴，抽真空3 min~5 min，然后加入乙酸乙酯（4.4）溶液洗脱，收集洗脱液于氮气下常温吹干，用1 mL乙酸溶液（4.6）溶解定容，供液相色谱-质谱/质谱联用仪测定。 浓缩果汁、果酱等浑浊试样 取4 g试样（精确到0.01 g）于一具塞离心管中，加入20 mL水以均质机充分均质，再加入200 μL果胶酶溶液（4.5）混匀，30℃空气浴（或水浴）条件下避光摇震过夜，在酶解后的溶液中加入20 mL乙酸乙酯，漩涡提取3 min，于4000 r/min离心5 min，转移上层乙酸乙酯提取液，再用20 mL乙酸乙酯重复提取一次。合并两次乙酸乙酯提取液，过无水硫酸钠后，取20 mL氮吹浓缩至干，用2 mL乙酸溶液（4.6）溶解残渣并定容。净化过程同6.1.1。 固体样品 取100 g样品进行粉碎后取4 g试样（精确到0.01 g）于一具塞离心管中。其余步骤同6.1.2。 测定 液相色谱参考条件 色谱柱：C18填料，规格：100 mm×2.0 mm×3.0 μm或相当者； 流动相：流动相为水和甲醇，流动相梯度见表1。 流速：0.4 mL/min； 柱温：25℃ 进样量：5 μL。 流动相的梯度洗脱程序 时间/min 0.0 1.0 3.0 4.0 4.1 6 乙腈/% 10 10 60 60 10 10 质谱条件 离子化模式：展青霉素电喷雾电离为负离子模式（ESI-）。 质谱扫描方式：多反应监测（MRM）。 其他质谱条件参见附录A。 液相色谱-质谱/质谱测定 定量测定 根据样液中展青霉素浓度，选定峰面积相近的标准工作溶液，标准工作溶液及样液中展青霉素响应值应在仪器检测线性范围内。在上述仪器条件下，展青霉素参考保留时间约3.18 min。标准溶液的液相色谱-质谱/质谱多反应监测谱图