重组溶血素蛋白用于单增李斯特菌快速检测的效果.pdfVIP

15 ·3253 · 郭宏华等 重组溶血素蛋白用于单增李斯特菌快速检测的效果 第 期 重组溶血素蛋白用于单增李斯特菌快速检测的效果 郭宏华 刘 娟 刘百歌 张晓静 晁 阳 何成彦 张学英 ( ， 130033) 吉林大学中日联谊医院 吉林 长春 〔 〕 ， 。 PCR 摘 要 目的 制备单增李斯特菌的溶血素重组蛋白 获得溶血素的诊断用抗原和单克隆抗体 方法 以 法扩增单核细胞增多性李氏 hly ， ， ， Balb / c ， 。 3 杆菌 基因 构建原核表达载体 获得重组溶血素蛋白 免疫 小鼠 制备单克隆抗体 结果 运用杂交瘤技术成功得到 株稳定分泌单克隆 2F5 、5H1 8F9 ， ， 2F5 、5H1 8F9 IgG2b 、IgG3 IgGM 。 抗体的杂交瘤细胞株即 和 并获得免疫球蛋白 测定 和 单克隆抗体亚型分别为 和 结论 本研究克隆 hly ， ， 。 和表达单增李斯特菌的 基因 研制基于溶血素的诊断用抗原和单克隆抗体 为检验分析单增李斯特菌及制备基因工程疫苗奠定基础 〔 〕 ; ; ; 关键词 李斯特菌 单克隆抗体 细胞融合 有限稀释法 〔 〕 R735. 7 〔 〕 A 〔 〕 1005-9202 (2012)15-3253-03 ;doi :10. 3969 /j. issn. 1005-9202. 2012. 15. 053 中图分类号 文献标识码 文章编号 ， ， ，PBS 6 ， － 20℃ 。 1 × 108 单增李斯特菌是李斯特菌属中致病性最强的 是人类最重 中 经甲醛固定 洗 次 保存于 备用 取 溶 〔1 〕 100 l PBS ， 。1 ， 于 μ 中初次免疫小鼠 腹腔注射 个月后进行第二 要的食源性病原菌 也是引起人类和动物李斯特菌病的主要 ， 、 ， ， ; 3 d ， 致病菌 可造成多种动物如猪 鸡等畜禽死亡 人感染后可造成 次免疫 菌体量同初次免疫 融合前 加强免疫 剂量减为原 、 、 、 、 、 、 来的一半。 脑膜炎 新生儿败血症 早产 死胎 脓肿 心内膜炎 单核细胞 〔2 〕 ， ， 30% ～ 40% 。 增多等疾病 死亡率很高 可高达 近年来在世 1. 2. 3 细胞融合 界上很多国家也报道了由于污染单增李斯特菌而发生的食物 1. 2. 3. 1 培养骨髓瘤细胞NS-1 融合前骨髓瘤细胞用8-AG 〔3 〕 。 ， LM