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食品中过敏原成分环介导等温扩增（LAMP）检测方法 第19部分：牛奶 编制说明 1 基本信息 1.1 标准草案名称 中文 食品中过敏原成分环介导等温扩增（LAMP）检测方法 第19部分：牛奶 英文 Loop-mediated isothermal amplification detection method for allergen components in food Part 19: milk 1.2 与国际标准和国外先进标准一致程度情况 等同 修改 非等效 标准号 英文名称 中文名称 1.3 任务来源 批准立项的文件名称和文件号 《关于下达2012年第一批出入境检验检疫行业标准制（修）订计划项目的通知（国认科[2012]36号）》 计划编号 2012B141 1.4 制（修）订情况 √制订 修订 替代的标准编号 1.5 起止时间 2012年09月～2013年12月 1.6 起草单位 中国检验检疫科学研究院、北京出入境检验检疫局 1.7 起草人 曾静、张西萌、魏海燕、付溥博、陈颖、马丹、刘莉、赵晓娟 1.8 专业类别 √1、食品（化妆品）检验；2、卫生检疫；3、动物检疫；4、植物检疫； 5、纺织产品检验；6、轻工产品检验；7、机电产品检验；8、化工、矿产品和金属材料检验；9、管理；10、鉴定；11包装及危险化学品 1.9 标准体系表代码 1.10 调整情况 2 背景情况 2.1 目的、意义 食物过敏已成为重要的食品安全问题。过敏性疾病发病率呈逐年上升趋势。据文献报道40%的小孩被诊断出在某种程度上患有过敏性疾病，1990 ～ 2000 年在英国和爱尔兰已有8 人死于此病。食物过敏目前只能预防，不可治愈。为了维护易过敏消费者的利益，美国和欧盟制定了食品致敏原标签法规，法规要求生产企业明确标明其产品中是否含有8 大类和12 种主要的食品致敏原，包括谷物、甲壳类动物、鸡蛋、鱼类、花生、大豆、乳及乳制品、坚果、芝麻、芹菜、芥末等。牛奶是其中最常见的过敏原之一，在小于3岁的婴幼儿中发病率为1.6%～2.8%。牛奶过敏已引起社会的关注，日本、澳洲和西方国家要求含有牛奶成分的食品必须标注牛奶过敏标识。目前，牛奶过敏原的检测方法主要有基于蛋白质检测的SDS/HPLC和HPLC-MS等。这些方法本可直接检测到过敏原蛋白。但在食品加工过程中，蛋白质空间构象已被破坏，从而影响检测的准确性。目前已有研究证实变性后的部分蛋白可与抗体结合引起假阳性；此外，上述方法存在检测周期较长、不稳定因素多、工作量大等缺点。近年来欧、美、日等发达国家通过严密的科学调查和立法认证。相继出台了规范食品中过敏物质标示的法律法案，对食品标签上过敏成份的标注做出了严格的规定并开始对部分进口食品进行过敏原成份检测。中国对食品过敏原的研究和关注刚刚起步，与国外发达国家相比有着较大的差距。在中国《食品标签通用标准》(GB7718-1994)法规中没有提及食品过敏原的内容．更没有强制各食品生产厂家对食品过敏原予以标注．国内消费者对食物过敏原标签更是知之甚少由于国内对食品过敏成分检测技术落后．致使中国食品出口企业经常因为食品过敏原标注的不正确而遭遇退货． 因此．在力求尽快与国际标准接轨的要求下．建立拥有自主知识产权的快速、标准化、高灵敏度的食品过敏原成份检验技术显得十分重要. 近几年国内外学者不断研究建立食品中致敏原成分的快速有效检测方法。确立以动物品种鉴定标志的线粒体基因，选取其中细胞色素b基因的保守区段目标基因，研究建立了可靠的环介导恒温扩增快速检测方法，因为食品致敏原的标签管理、监管、检测提供了可靠的技术保障。 本标准建立的是环介导等温扩增法（LAMP，Loop-mediated Isothermal Amplification）。其特点是：①恒温扩增： 因此不需要大型设备；②高特异性：采用六个区段，四条引物加环引物，扩增特异性高，可以根据是否扩增来判断目标基因的存在与否；③快速、高效扩增：扩增在不到1 h即可完成，且产率高；④灵敏度高：扩增模板可达10拷贝或更少；⑤鉴定简便：在核酸大量合成时，从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg2+结合，产生副产物-焦磷酸镁沉淀，可用肉眼观察判断扩增与否；另外，它利用恒温和低反应温度（65 ℃），操作非常简便。总体而言，LAMP法是一种简便、快速、高特异的基因扩增法，不需要特殊的试剂和仪器设备，采用该方法能建立起总成本低廉的检测体系，在过敏原食品检测等领域具有广阔的应用前景。 与常规PCR相比，LAMP法不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，精简了反应步骤，节约了反应时间。而TaqMan实时荧光 2.1 目的、意义 PCR检测方法有相对较高的技术要求和设备要求，并不适用于其他监管要求相对较低的国家，因此目前急