福辛普利干预对阿霉素大鼠蛋白激酶C及心肌重塑影响.docVIP

福辛普利干预对阿霉素大鼠蛋白激酶C及心肌重塑影响 　　[摘要] 目的 探讨福辛普利对阿霉素大鼠蛋白激酶C（PKC）表达与心肌胶原重塑的影响。 方法 将32只SD大鼠随机分为正常对照组（NC组，n = 8）、模型组（ADM组，n = 12）及福辛普利组（F组，n = 12），ADM组和F组制作心肌重塑模型，观察心肌的病理学改变；检测大鼠心肌组织PKC的表达及Ⅰ、Ⅲ型心肌胶原的表达并计算二者比值。 结果 F组大鼠大部分心肌组织损伤较ADM组明显减轻。F组心肌组织PKC表达，Ⅰ、Ⅲ型心肌胶原的表达及Ⅰ/Ⅲ比值较ADM组降低，但较NC组升高。 结论 PKC参与阿霉素诱导大鼠心肌纤维化。福辛普利干预能改善阿霉素诱导大鼠心肌纤维化，其机制可能与影响大鼠心肌细胞PKC表达有关。 　　[关键词] 福辛普利；蛋白激酶C；扩张型心肌病；心肌重塑 　　[中图分类号] R542.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）02（b）-0027-03 　　扩张型心肌病（dilated cardiomyopathy，DCM）是原发性心肌病中最常见的一种类型，临床以进行性心脏扩大和心力衰竭等为主要表现，预后较差，5年病死率高。DCM至今病因不明，发病机制不清楚，因此这方面的探索一直是儿科心血管领域的重要课题。本研究采用经典的阿霉素腹腔注射诱导大鼠DCM心肌胶原重塑动物模型，通过观察蛋白激酶C（PKC）与心肌胶原重塑的关系及血管紧张素转换酶抑制剂福辛普利对其的影响，研究PKC在肾素-血管紧张素-醛固酮系统激活相关的心肌胶原重塑中的作用，为探讨治疗DCM的新途径和ACEI抗心肌胶原重塑的机制提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　32只8周龄雄性SD大鼠，平均体重（250±30）g，由徐州医学院动物中心提供，盐酸阿霉素由浙江海正药业公司生产，福辛普利由中美上海施贵宝制药有限公司生产，PKC抗体购自北京博奥森生物技术公司，Ⅰ、Ⅲ心肌胶原免疫组化染色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，DAB显色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，实验过程在徐州医学院神经生物学实验室完成。 　　1.2 方法 　　将32只大鼠随机分为三组。正常对照组（NC组）8只：生理盐水2 mL/kg腹腔注射，每周1次，连续8周；模型组（ADM组）12只：参考相关文献[1-3]制作阿霉素心衰大鼠模型：盐酸阿霉素2 mg/kg腹腔注射，每周1次，连续8周；福辛普利组（F组）12只：盐酸阿霉素2 mg/kg腹腔注射，每周1次，连续8周，福辛普利10 mg/kg灌胃给药，于首次阿霉素应用后30 d开始，1次/d，连续4周。所有大鼠均于末次注射阿霉素后10 d，无菌取出大鼠心脏。光学显微镜下HE染色观察心肌细胞及心肌纤维结构的病理学改变；参照文献[4]的方法制作心肌Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白的免疫组化切片，检测各组大鼠心肌组织Ⅰ、Ⅲ型心肌胶原的表达并计算二者比值；采用Western blot方法检测大鼠心肌组织PKC的表达。 　　1.3 统计学方法 　　采用SPSS 13.0软件进行统计学处理，计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析（One-Way ANOVE）SNK法进行统计学分析。以P 0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 大鼠的一般状况 　　从实验第4周起，模型组大鼠开始出现中毒症状，表现为精神差，活动少，食量减少，腹泻，皮毛疏松。从第5周起，逐渐出现腹水，倚笼而立，肢冷，皮下水肿等心衰表现。整个实验过程中，正常对照组未见有大鼠死亡；模型组有3只大鼠死于心衰；福辛普利干预组有2只大鼠死亡，较少出现中毒症状，未见腹水等心衰表现。 　　2.2 心肌病理改变 　　HE染色光镜下显示正常对照组心肌细胞排列整齐，心肌纤维结构清晰，未见心肌纤维破坏，细胞质丰富均匀，细胞间隙正常（图1a，见封三）；模型组光镜下可见多灶性心肌纤维肌浆模糊，部分肌浆溶解、心肌细胞肥大、水肿、有不同程度的颗粒变性与空泡变性，心肌细胞间隙明显增宽，间质水肿，小灶性散在淋巴细胞及单核细胞浸润（图1b，见封三）；福辛普利干预组心肌结构较模型组有明显改善，大部分心肌纤维呈平行排列，结构清晰，间质有少量疏松结缔组织，少量空泡及散在淋巴细胞和单核细胞浸润（图1c，见封三）。 　　2.3 心肌组织Ⅰ、Ⅲ型心肌胶原表达 　　心肌组织Ⅰ、Ⅲ型心肌胶原的表达，模型组与正常对照组比较，Ⅰ、Ⅲ型心肌胶原的表达及Ⅰ/Ⅲ比值均升高（均P 0.01）。福新普利治疗组与模型组比较，Ⅰ、Ⅲ型心肌胶原的表达均降低（P 0.01）；福新普利治疗组与正常对照组比较，Ⅰ、Ⅲ型心肌胶原的表仍有升高（P 0.01）。见表1。 　　2.4 心肌组织