离体大鼠肠道菌群对类叶升麻苷代谢研究.docVIP

离体大鼠肠道菌群对类叶升麻苷代谢研究 　　[摘要]在离体培养的大鼠肠道菌群中加入类叶升麻苷进行厌氧孵育。采用HPLC监测类叶升麻苷在不同孵育时间点的变化，同时运用HPLCQTOFMS鉴定类叶升麻苷的代谢产物。结果表明离体的大鼠肠道菌群可以对类叶升麻苷进行代谢，代谢产物分别是3，4二羟基苯乙醇、咖啡酸和3（3′羟苯基）丙酸。 　　[关键词]类叶升麻苷；肠道菌群；代谢产物；液质联用 　　[Abstract]Acteoside was used for anaerobic incubation with rat intestinal flora in vitro. HPLC was used to detect the changes of acteoside at different incubation time points and HPLCQTOFMS was used to identify the metabolites of acteoside. The results showed that acteoside could be metabolized by rat intestinal flora in vitro and the metabolites were 3，4dihydroxyphenyl acid， caffeic acid and 3（3′hydroxyphenyl） propionic acid. 　　[Key words]acteoside； intestinal flora； metabolites； LCMS 　　doi：10.4268/cjcm 　　类叶升麻苷（acteoside），又名毛蕊花糖苷和洋丁香酚苷[1]，属于苯乙醇苷类化合物（图1）。地黄[2]、肉苁蓉[3]、枇杷叶紫珠[4]和益母草[5]等药材中均含有类叶升麻苷。现代药理研究表明，类叶升麻苷具有改善脑损伤[6]、改善急性肺损伤[7]、抗炎[89]、抗氧化[1011]和抗癌[1214]的作用。此外还具有抑制脂肪吸收，治疗肥胖[15]的功效，可见其在生物体内具有显著活性。但文献报道类叶升麻苷生物利用度仅为012%，为吸收不良药物[16]。肠道菌群在糖苷类化合物的代谢过程中起着重要作用，大多数糖苷类化合物可经肠道菌群酶解为苷元等代谢产物而发挥药效[1718]。 　　本文建立了用于代谢物分离及定性的液质联用法（HPLCQTOFMS），能够提供色谱峰、相对分子质量、子离子碎片质荷比，这为代谢产物的鉴定提供了丰富的信息。本实验为进一步研究类叶升麻苷在体内的代谢奠定基础。 　　1材料 　　YQXⅡ厌氧培养箱（上海跃进医疗器械有限公司）；METTLER XS205微量分析天平（南京皓海科学仪器仪表有限公司）；Eppendorf5424小型高速离心机（北京东南仪诚实验室设备有限公司）；XW80A微型漩涡混合仪（上海沪西分析仪器厂有限公司）；MLS3751L高压蒸气灭菌锅（松下健康医疗器械株式会社）；氮吹仪（美国 Organomation Associates公司）；ZK82B电热真空干燥箱（上海仪器厂有限公司）；Agilent 1100 HPLC（美国安捷伦公司），包括在线脱气机，四元泵，高性能自动进样器，柱温箱，二极管阵列检测器；安捷伦6210高分辨飞行时间质谱仪，配有标准电喷雾离子源（ESI）及MassHunter Acquisition和MassHunter Qualitative工作站；MilliQ超纯水系统（美国Millipore公司）。 　　类叶升麻苷对照品（批号131014，成都普菲德生物技术有限公司）；磷酸氢二钾、硫酸铵、硫酸镁、L半胱氨酸、L抗坏血酸、牛肉膏、胰蛋白胨（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；磷酸二氢钾、氯化钠、无水氯化钙、无水碳酸钠、浓盐酸、甲醇、乙酸乙酯（分析纯，南京化学试剂有限公司）；乙腈、甲酸（色谱纯，美国天地公司）；蒸馏水由MilliQ超纯水系统制得。 　　SD大鼠6只，体重（250±10） g，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供，合格证号SCXK （苏） 　　2方法与结果 　　21厌氧培养基的制备[19] 　　375 mL溶液A（078% K2HPO4），375 mL溶液B[含047%KH2PO4，118%的NaCl，12% （NH4）2SO4，012% CaCl2，025% MgSO4?H2O]，05 g L半胱氨酸，20 mL 25%的L抗坏血酸，50 mL 8%的Na2CO3，将10 g牛肉提取物和10 g胰蛋白胨溶于蒸馏水中，然后用1 mol?L-1盐酸溶液调节pH至75～77，定容至1 L。所获得的厌氧培养液分装于EP管中，在