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硫化氢抑制前列腺癌骨转移PC3细胞增殖和侵袭体外研究
硫化氢抑制前列腺癌骨转移PC3细胞增殖和侵袭体外研究
[摘要] 目的 探讨硫化氢对前列腺癌骨转移PC-3细胞增殖和侵袭的影响及其可能机制。 方法 分别用0、1、2、4 mmol/L NaHS(硫化氢载体)作用前列腺癌骨转移PC-3细胞36 h,CCK-8比色法法检测细胞存活率,transwell法检测细胞侵袭能力,ELISA法检测细胞MMP-2和MMP-9分泌能力,Western-Blot法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。 结果 硫化氢对PC-3细胞生长的影响:用硫化氢孵育PC-3细胞36 h,1.0 mmol/L NaHS组细胞存活率与对照组比较,差异无统计学意义(P 0.05);2、4 mmol/L NaHS作用PC-3细胞36 h,细胞存活率降低,与对照组比较,能不同程度抑制PC-3细胞的生长,差异有统计学意义(P 0.05);2、4 mmol/L NaHS作用PC-3细胞36 h,细胞侵袭数减少,与对照组比较,能不同程度抑制PC-3细胞的侵袭,差异有统计学意义(P 0.05);2、4 mmol/L NaHS作用PC-3细胞36 h,MMP-2和MMP-9分泌量减少,与对照组比较,能不同程度抑制PC-3细胞MMP-2和MMP-9的分泌,差异有统计学意义(P 0.05或P 0.01)。Western blot检测PC-3细胞Bcl-2/Bax蛋白表达:1、2、4 mmol/L NaHS组,Bcl-2表达降低,Bax表达升高,呈浓度依赖性。 结论 2 mmol/L浓度以上的NaHS能影响Bcl-2和Bax表达和MMP-2 MMP-9分泌来抑制PC-3细胞的生长和侵袭。
[关键词] 硫化氢;前列腺癌;骨转移;PC-3细胞;增殖;侵袭
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)08(b)-0024-04
前列腺癌发病率居美国男性恶性肿瘤中第一位[1],每年因前列腺癌死亡的患者数仅次于肺癌居第二位,其发病率在我国也呈逐年升高趋势。前列腺癌最易发生骨转移,85%~100%死于前列腺癌的患者中合并骨转移[2]。发生骨转移后临床上缺乏有效的治疗手段,其确切转移机制目前也不十分清楚[3-4]。因此,探寻新的治疗前列腺癌骨转移的方式及药物很有必要。硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)是一种能溶于水有臭鸡蛋气味的气体,作为一种气体信号分子受到越来越广泛的研究[5]。在哺乳动物、鱼类乃至无脊椎动物体内,都可以生成内源性H2S气体,发挥类似神经递质的中枢调节作用。H2S发挥生物学效应的重要机制是调节细胞的增殖和凋亡[6-7],Li等[8]报道硫化氢促进恶性胶质瘤的生长,Cao等[9]报道硫化氢导致胰腺腺癌细胞凋亡。目前的研究发现,释放硫化氢的非甾体抗炎药提高其对前列腺癌细胞的抗癌作用[10],但机制还不太明确。本试验以硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS)作为硫化氢的供体,探讨硫化氢对前列腺癌骨转移PC-3细胞生长、侵袭的影响,并初步探讨其可能的机制。
1 材料与方法
1.1 试剂
NaHS购自Sigma公司;cck-8购自同仁公司;胎牛血清购自Gibco公司;抗Bcl-2、抗Bax和Western-Blot检测试剂盒购自Cell Signaling Technology Inc。细胞蛋白提取试剂盒购自碧云天生物技术有限公司。
1.2 细胞培养
前列腺癌细胞系PC-3购自ATCC,细胞置于含10%胎牛血清F-12培养基中,于37℃、5% CO2条件培养,取对数生长期细胞进行试验。
1.3 细胞存活率的检测
根据NaHS浓度将实验分为0、1、2、4 mmol/L四组,每组均作用PC-3细胞36 h,检测不同浓度下细胞存活率。取对数生长期细胞,以10 000个/孔接种于96孔板,37℃、5% CO2条件下培养过夜待细胞贴壁,用含有不同处理因素的培养基培养细胞,每组设5个复孔。处理结束后加入CCK-8(每孔100 μL加10 μL CCK-8),轻摇,37℃孵育4 h,然后用酶联免疫检测仪测定每孔在450 nm波长处的吸光度(OD)。取5孔OD值的平均值,按公式计算各组细胞存活率,存活率(%)=(实验组OD-空白对照组OD)/(正常对照组OD-空白对照组OD)×100%,实验重复3次,以0 mmol/L NaHS组为对照组,存活率为100%。
1.4 Transwell侵袭实验
1.5 ELISA检测PC-3上清液MMP-2、MMP-3分泌
1.6 Western-Blot法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达
1.7 统计学方法
用SPSS 13.0统计软件进
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