硫化氢抑制前列腺癌骨转移PC3细胞增殖和侵袭体外研究.docVIP

硫化氢抑制前列腺癌骨转移PC3细胞增殖和侵袭体外研究 　　[摘要] 目的 探讨硫化氢对前列腺癌骨转移PC-3细胞增殖和侵袭的影响及其可能机制。 方法 分别用0、1、2、4 mmol/L NaHS（硫化氢载体）作用前列腺癌骨转移PC-3细胞36 h，CCK-8比色法法检测细胞存活率，transwell法检测细胞侵袭能力，ELISA法检测细胞MMP-2和MMP-9分泌能力，Western-Blot法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。 结果 硫化氢对PC-3细胞生长的影响：用硫化氢孵育PC-3细胞36 h，1.0 mmol/L NaHS组细胞存活率与对照组比较，差异无统计学意义（P 0.05）；2、4 mmol/L NaHS作用PC-3细胞36 h，细胞存活率降低，与对照组比较，能不同程度抑制PC-3细胞的生长，差异有统计学意义（P 0.05）；2、4 mmol/L NaHS作用PC-3细胞36 h，细胞侵袭数减少，与对照组比较，能不同程度抑制PC-3细胞的侵袭，差异有统计学意义（P 0.05）；2、4 mmol/L NaHS作用PC-3细胞36 h，MMP-2和MMP-9分泌量减少，与对照组比较，能不同程度抑制PC-3细胞MMP-2和MMP-9的分泌，差异有统计学意义（P 0.05或P 0.01）。Western blot检测PC-3细胞Bcl-2/Bax蛋白表达：1、2、4 mmol/L NaHS组，Bcl-2表达降低，Bax表达升高，呈浓度依赖性。 结论 2 mmol/L浓度以上的NaHS能影响Bcl-2和Bax表达和MMP-2 MMP-9分泌来抑制PC-3细胞的生长和侵袭。 　　[关键词] 硫化氢；前列腺癌；骨转移；PC-3细胞；增殖；侵袭 　　[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）08（b）-0024-04 　　前列腺癌发病率居美国男性恶性肿瘤中第一位[1]，每年因前列腺癌死亡的患者数仅次于肺癌居第二位，其发病率在我国也呈逐年升高趋势。前列腺癌最易发生骨转移，85%～100%死于前列腺癌的患者中合并骨转移[2]。发生骨转移后临床上缺乏有效的治疗手段，其确切转移机制目前也不十分清楚[3-4]。因此，探寻新的治疗前列腺癌骨转移的方式及药物很有必要。硫化氢（hydrogen sulfide，H2S）是一种能溶于水有臭鸡蛋气味的气体，作为一种气体信号分子受到越来越广泛的研究[5]。在哺乳动物、鱼类乃至无脊椎动物体内，都可以生成内源性H2S气体，发挥类似神经递质的中枢调节作用。H2S发挥生物学效应的重要机制是调节细胞的增殖和凋亡[6-7]，Li等[8]报道硫化氢促进恶性胶质瘤的生长，Cao等[9]报道硫化氢导致胰腺腺癌细胞凋亡。目前的研究发现，释放硫化氢的非甾体抗炎药提高其对前列腺癌细胞的抗癌作用[10]，但机制还不太明确。本试验以硫氢化钠（sodium hydrosulfide，NaHS）作为硫化氢的供体，探讨硫化氢对前列腺癌骨转移PC-3细胞生长、侵袭的影响，并初步探讨其可能的机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 试剂 　　NaHS购自Sigma公司；cck-8购自同仁公司；胎牛血清购自Gibco公司；抗Bcl-2、抗Bax和Western-Blot检测试剂盒购自Cell Signaling Technology Inc。细胞蛋白提取试剂盒购自碧云天生物技术有限公司。 　　1.2 细胞培养 　　前列腺癌细胞系PC-3购自ATCC，细胞置于含10%胎牛血清F-12培养基中，于37℃、5% CO2条件培养，取对数生长期细胞进行试验。 　　1.3 细胞存活率的检测 　　根据NaHS浓度将实验分为0、1、2、4 mmol/L四组，每组均作用PC-3细胞36 h，检测不同浓度下细胞存活率。取对数生长期细胞，以10 000个/孔接种于96孔板，37℃、5% CO2条件下培养过夜待细胞贴壁，用含有不同处理因素的培养基培养细胞，每组设5个复孔。处理结束后加入CCK-8（每孔100 μL加10 μL CCK-8），轻摇，37℃孵育4 h，然后用酶联免疫检测仪测定每孔在450 nm波长处的吸光度（OD）。取5孔OD值的平均值，按公式计算各组细胞存活率，存活率（%）=（实验组OD-空白对照组OD）/（正常对照组OD-空白对照组OD）×100%，实验重复3次，以0 mmol/L NaHS组为对照组，存活率为100%。 　　1.4 Transwell侵袭实验 　　1.5 ELISA检测PC-3上清液MMP-2、MMP-3分泌 　　1.6 Western-Blot法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达 　　1.7 统计学方法 　　用SPSS 13.0统计软件进