纳豆生产中油脂对枯草杆菌产纳豆激酶影响研究.docVIP

纳豆生产中油脂对枯草杆菌产纳豆激酶影响研究 　　摘要：纳豆作为一种传统的发酵食品，在日常生活中扮演者十分重要的角色。其在发酵过程中产生的纳豆激酶是一种溶栓性很好的物质，其作用远远超过溶栓酶等物质在人体中发挥的作用，因此其生产越来越受到人们的重视。本实验旨在通过纳豆原料中油脂对产酶的影响，确定最大的产酶量，以此来提高产酶效率，达到在酶产量不变的情况下获取油脂副产品，以便降低生产成本，便于工业产酶的大量生产。结果：在豆粕残油量1%计算下，额外添加梯度油脂对枯草芽孢杆菌活菌产酶的影响不显著。 　　关键词：纳豆 纳豆激酶 油脂 　　中图分类号：TQ920.4 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）08-0001-04 　　1 引言 　　纳豆是日本的一种传统发酵食品，由黄豆经过纳豆芽孢杆菌发酵而成[1]。生产工艺是将煮熟的大豆冷却后接种纳豆菌种，经过恒温发酵、4℃左右后熟等工艺制成，其成品有金黄的色泽，口感较为酥软，挑起时呈现出较长的拉丝现象[2]，当用纳豆与适宜作料配制后可制作成为可口的美食。纳豆激酶（nattokinase，NK）是在纳豆发酵过程中由纳豆枯草杆菌产生。作为纳豆生产中的主要含有物，其重要的溶纤维和溶栓[3]等作用已经在临床以及保健品剂中得到了广泛的应用，同时因其副作用小、溶栓彻底等特点已经得到医学和养生学家的重视。 　　随着粮食作物成本及劳动成本的不断提高，降低成本资金投入，增大原料利用率、提高产品的提取率已经成为亟待解决的问题，因此，在成本不变甚至不断增加的情况下，降低原料的投入，扩大收益率，增加产率已经成为必要途径。本文研究了纳豆生产中油脂对枯草芽孢杆菌产酶的影响，通过此研究来确定油脂在纳豆发酵过程中对枯草杆菌产酶的影响，以便达到生产酶制品的同时对大豆油脂进行部分提取，以便降低成本，提高原料利用率达到生产原料的优化配置和转化，以实现企业效益的最大化。 　　2 材料与方法 　　2.1 实验材料 　　2.1.1 生产菌株 　　日本株式会社赠送，菌株类型为枯草芽孢杆菌。 　　2.1.2 主要仪器（见表1） 　　2.1.3 主要试剂及配制方法 　　2.1.3.1 主要试剂 　　分析纯试剂：三氯乙酸、磷酸、磷酸二氢钠、氢氧化钠、无水碳酸钠、氯化钠、盐酸、钨酸钠、钼酸钠、液体溴、硫酸锂、无水乙醇；生化试剂：干酪素、酪氨酸、酵母膏、蛋白胨、琼脂。 　　2.1.3.2 主要试剂配制方法 　　（1）2%酪蛋白溶液：准确称取干酪素5.000g，浸泡于50mL 0.1N NaOH溶液中放入冰箱中过夜，水浴中加热煮沸使之溶解，再用pH7.5缓冲液定容至250mL的容量瓶中，放入冰箱贮藏。 　　（2）酪氨酸标准溶液：取酪氨酸放入105℃干燥箱中烘干至恒重，精确称取0.1g酪氨酸干粉，用少量0.2N盐酸溶解并用蒸馏水定容至100mL，浓度为1000μg/mL。 　　（3）Folin-酚试剂：称取钨酸钠（Na2Wo4?2H2O）10g、钼酸钠（Na2MoO4?2H2O）2.5g，加蒸馏水70mL于250mL的烧瓶中溶解。后加入85%的H3PO4 5mL，浓HCl 10mL，使用回流装置，使其慢慢沸腾10个小时。停止加热，冷却后称量硫酸锂（Li2SO4?H2O）15g，水5mL，液体溴2-3滴，开口继续煮沸15min，使溴水尽量挥发。待冷后用水稀释至100mL，过滤后放入深色瓶中，保存于阴凉处（假如呈绿色，应该继续加数滴液体溴，继续蒸煮15min），显色时加水2倍。 　　（4）0.4M三氯乙酸溶液：称取三氯乙酸晶体6.536g用蒸馏水定容于100mL容量瓶中，用棕色试剂瓶保存于避光干燥处。 　　（5）0.2M pH7.5磷酸盐缓冲液：准确称取Na2HPO4 23.876g；NaH2PO45.196g溶解于500mL蒸馏水中保存。 　　（6）0.4M Na2CO3溶液：准确称取无水碳酸钠4.2396g，溶解于100mL蒸馏水中保存。 　　（7）0.1N NaOH溶液：准确称取NaOH 0.4001g，溶解于100mL蒸馏水中。 　　（8）0.9% NaCl溶液：准确称取NaCl 0.9000g，溶解于100mL蒸馏水中保存。 　　2.1.4 培养基[4] 　　（1）LB固体培养基：NaCl 1.000g，琼脂粉1.500g，酵母膏0.500g，蛋白胨1.000g，pH7.0-7.5；（2）LB液体培养基：NaCl 2.000g，蛋白胨2.000g，酵母膏1.000g，蒸馏水200mL，pH7.0-7.5。 　　2.2 方法 　　2.2.1 纳豆生产的工艺流程 　　2.2.1.1 种子液制备 　　（1）配制：用电子天平称取酵母膏1.000g；蛋白胨 2.000g；NaCl