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纤维素酶系组分活性对杏鲍菇生长影响 　　摘要 纤维素酶系性能是影响菌丝体产菇质量的重要因素，通过比较不同培养条件下杏鲍菇菌株产纤维素酶系的组分活力特征，阐述酶系组分活力对菌菇生长过程中的纤维素基质降解的生理性能的影响。结果表明：杏鲍菇菌的纤维素酶系中内切葡聚糖酶组分（C1酶）活力变化明显，活性较强，β-葡萄糖苷酶组分（BG酶）活力升高受C1酶活力变化的影响，并且 C1酶活力和BG酶活力的高低与菌丝生长速度关系密切，而外切葡聚糖酶组分（Cx酶）活力弱而稳定。进一步的分析显示采用低结晶化程度的纤维素基质对纤维素酶系活力产生有较强的诱导作用。 　　关键词 杏鲍菇；纤维素酶系；诱导作用 　　中图分类号 S646；Q556 文献标识码A文章编号1007-5739（2008）20-0008-03 　　 　　纤维素酶是包括多种水解酶构成的一个复杂的纤维素酶系，主要有3大组分：葡聚糖内切酶（endo-1，4-β-D-glucanase，EC 3.2.1.4，简称EG），也称为Cl酶；葡聚糖外切酶（exo-1，4-β-D-glucanase，EC 3.2.1.91）又称Cx酶；β-葡萄糖苷酶（β-Glucosidase，EC3.2.1.21，简称BG）[1，2]。在以纤维素分子为主要碳源基质的菌菇生长过程中，菌丝体产纤维素酶性能是影响菌菇质量的重要因素[3]。 　　杏鲍菇（Pleurotus eryngii）又名毛头鬼伞、毛鬼伞，由于具有菇形大、生长快、品质优良、口感好、营养全面等优点，是近年来推广栽培的优质食用菌品种[4,5]。关于杏鲍菇的生物学特性及其栽培技术的研究报道较多[4-6]，而对其栽培过程中的酶学特性探讨并不多见。 　　本文以杏鲍菇1号菌株为试验研究对象，分析比较在不同培养条件下菌菇生长过程中产纤维素酶系组分特征及其活性变化规律，了解菌菇纤维素酶的活性在菌丝生长发育过程中所起的作用，为进一步提高优质菌菇的产业化能力提供资料。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1材料 　　食用菌菌种：杏鲍菇1号原菌种，从上海市农业科学院食用菌研究所购置。 　　1.2培养基配制 　　1.2.1PDA培养基。称取马铃薯200g，去皮，切成1cm3小块，煮沸30min，加入20g蔗糖，20g琼脂，补足水至1000mL，pH自然，121℃高压灭菌30min。 　　1.2.2液体摇瓶培养基。羧甲基纤维素钠4.5g，麸皮20g，NaNO3 2g，K2HPO4 1.5g，KCl 0.5g，MgSO4 0.25g，FeSO4 0.005 g，水1 000mL，pH自然，121℃灭菌20min。 　　1.2.3固体培养基。棉籽壳400g，麸皮56.5g，KH2PO4 1g，（NH4）2SO4 2g，加入适量的水，拌匀，121℃灭菌1h。 　　1.2.4备选纤维素基质。甜高粱渣、木屑、稻草粉、棉籽壳和羧甲基纤维素钠（CMC-Na）。 　　1.3纤维素酶浸提液的配制 　　配制0.2mol/L pH4.6的磷酸盐缓冲液，加0.2%吐温-80酶增溶剂。 　　1.4酶液制备 　　1.4.1液体培养酶液。杏鲍菇1号接种到液体培养基中，装150mL培养基于500mL三角瓶，22℃，200rpm摇瓶培养5d。摇瓶培养液3 000rpm、10℃冷冻离心10min，取离心清液作酶液。 　　1.4.2固体培养基料中酶的提取。杏鲍菇1号原种转接到固体培养基中，22℃培养15～20d，以1∶2（w/w）加入酶提取液，搅拌15min，4℃浸提2h。混合液3 000rpm、10℃冷冻离心10min，取离心清液作酶液。 　　1.5纤维素酶活力的测定[7,8] 　　纤维素酶总活力（FP活力）测定；内切酶组分活力（C1酶活力）测定；外切酶组分活力（Cx酶活力)测定；β-葡萄糖苷酶活力（BG酶活力）测定。 　　 　　2试验结果 　　 　　2.1杏鲍菇产纤维素内切酶组分活力特征 　　内切纤维素酶（C1酶）组分是菌菇生长过程中获取碳源物质的主要限制因子，分析其内切酶活力有利于推断菌体生长状态。杏鲍菇1号菌丝在液体和固体条件下分别培养120h和15d内分段测定各自的C1酶组分活力变化。结果如图1、图2所示。可以看出，菌菇在液体培养条件下产酶速度明显快于固体培养，96h酶活力达到最高，而固体培养则需要11d酶活力才能提高。从酶作用的底物看，说明要增加纤维素物质的分解，溶解状态的非结晶态纤维素基质更有利于酶的作用，可以增加菌体对还原糖的获取。此外，菌菇在培养过程中的C1酶活力变化率也存在较大的差异，固体培养基质上C1酶活力变化对杏鲍菇菌丝生长速率影响特别显著，C1酶活力与培养过程中菌丝生长旺盛状态相一致，证实了C1酶活力的大小与菌丝生长有密切关系。