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耳聋基因芯片对耳聋高危人群检测临床意义 　　[摘要]目的分析耳聋高危人群检测中耳聋基因芯片的临床应用价值。方法方便选择该院2015年8月-2016年12月接收的耳聋患者120例，均应用耳聋基因芯片实施突变检测，观察检测结果。结果120例患者中，63例检出基因突变，检出率39.1%；63例检出基因突变患者中，重度耳聋38例，极重度耳聋25例；57例未检出基因突变患者中，重度耳聋50例，极重度耳聋7例。结论耳聋高危人群检测中，耳聋基因芯片的应用可提升检出率，降低耳聋发生率。 　　[关键词]耳聋基因芯片；耳聋高危人群；检测；临床意义 　　[中图分类号]R764 [文献标识码]A [文章编号]1674-0742（2017）10（a）-0055-03 　　耳聋在临床中比较常见，发病后不仅交流受到影响，而且生活?|量会严重降低。在耳聋患者中，0.1%～0.3%为新生儿。从致病原因看，由遗传因素导致的耳聋患者占据总数的50%以上。因耳聋存在高度的基因及位点遗传异质性，且相关于多个基因的突变，因而如采取传统检测4方法，仅能将同一基因同一位点检测出来，达不到筛查诊断要求。研究指出，耳聋高危人群检测中，耳聋基因芯片技术具有较高的应用价值，可与筛查诊断要求相符合。因此，该院以2015年8月-2016年12月接收的汉族耳聋患者120例为研究对象，探讨耳聋基因芯片的应用价值，现报道如下。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 　　方便选择新疆医科大学第一附属医院接收的汉族耳聋患者120例，男68例，女52例；年龄3个月～59岁，平均（32.7±6.4）岁。纳入标准：均符合耳聋诊断标准，患者及（或）家属均对该研究知情，且自愿参与研究。 　　1.2方法 　　研究人员调查记录患者发病年龄、家族史、疾病史等；所有患者均接受耳聋基因芯片（北京博奥生物有限公司）检测，检测步骤如下。 　　1.2.1标本采集与处理于患者肘静脉处采集血液标本5mL，置入采血管（EDTANa2抗凝）中，全血基因组DNA提取时，利用全血核酸提取试剂盒（天根生化公司），完成后在20℃冰箱中保存。 　　1.2.2PCR反应引物共8组，针对8个突变位点[GJB2基因（突变位点：35delG、176dell6/235delc、299-300de1AT），SLC26A4基因（突变位点：2168AG、IVS7-2AG），线粒体12rRNA基因（突变位点：1494CT、1555AG）]，将其分为两个反应体系，分别标记为A、B，实施多重PCR，A、B反应体系各20μL，将100～200ng/μL浓度的待测全血基因组DNA加入其中，扩增引物混合物12.5μL，扩增试剂混合物4.5μL。PCR反应时，程序如下：37℃下，反应10min；温度提高至95℃，反应15min；温度再提高至96℃，进行1min预变性；之后温度降低至94℃，反应30s；继续降低至55℃，反应30s；提高到72℃，反应45s，循环共进行32个；降低至70℃，反应45s，最终降低至60℃，反应10min。反应期间，温度由94℃降低至55℃时，降低速度控制在0.4℃/s，而由55℃提高至70℃时，提升速度控制在0.2℃/s。 　　1.2.3杂交 95℃条件下，于金属浴中放置PCR产物，给予10min变性，完成后，迅速向冰水中放置PCR产物，冰浴3min。从A、B反应体系管中将相同标本取出，量均为25μL，向试管（内置杂交缓冲液10μL）中混入，混合均匀会，于芯片微阵列区域中加入，用盖玻片封闭杂交盒后，在预热杂交箱（50℃）中放置，进行1h保温。 　　1.2.4洗片 完成杂交后，取出芯片，在洗涤液I（42℃）中放置，之后通过摇床，进行2min洗涤，随后取出，并于洗涤液Ⅱ（42℃）中快速放人，再经摇床给予2min洗涤。结束后，在玻片架上放置芯片，利用离心机甩干液体，离心速度1200r/min，时间2min。 　　1.2.5芯片扫描 芯片扫描利用扫描仪进行，扫描仪采用晶芯LuxScanTM 10K/B微阵列芯片.激光扫描强度设置为90，激光波长选择532nm。 　　1.3观察指标 　　观察所有患者检测结果，同位点中，探针W信号表现为阳性时，位点属于野生型；探针M信号表现为阳性时，位点属于纯合突变型；探针W信号与探针M信号均表现为阳性时，位点属于杂合突变型。 　　2结果 　　120名患者中，63例检出基因突变，检出率39.1%，其中，48例GJB2基因突变携带者，15例SLC26A4基因突变携带者。48例GJB2基因突变携带者中，235delc纯合突变28例，235delC杂合突变16例，235delC/299-300delAT复合突变4例；15例SLC26A4基因突变携带者中，IVS7-2AG纯合突变8例，IV