脑心通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤及MMP2MMP9表达影响.docVIP

脑心通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤及MMP2MMP9表达影响 　　摘要：目的观察脑心通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注脑组织病理变化及MMP－2、MMP－9表达的影响，并探讨其可能的保护机制。方法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，应用HE及S－P免疫组化法分别观察模型组及用药组大鼠全脑组织的病理改变及MMP－2、MMP－9表达的变化。结果假手术组大鼠脑组织形态结构正常，MMP－2、MMP－9见少量散在阳性表达或不表达；模型组大鼠大脑缺血再灌注区组织明显水肿、蜕变、坏死伴少量炎细胞浸润，对侧大脑相应区及双侧小脑轻度水肿，MMP－2、MMP－9表达较假手术组对应区显著升高(P＜0.01或P＜0.05)，其中缺血侧大脑以坏死区边缘脑组织表达为甚，且较对侧大脑及双侧小脑明显升高(P＜0.05)；脑心通用药组大鼠大脑缺血区组织水肿、蜕变、坏死较模型组明显减轻，对侧大脑相应区及双侧小脑脑组织形态结构正常，MMP－2、MMP－9表达较模型组对应区显著降低(P＜0.05)。结论脑心通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注后包括病灶在内的全脑损伤有保护作用，其作用机制可能与降低MMP－2、MMI－9表达有关。 　　关键词：脑缺血；再灌注；脑心通胶囊；免疫组织化学；大鼠 　　中图分类号：R743.31 R285.6 文献标识码：A 文章编号：1672一1349(2007)04―0328―03 　　 　　脑缺血再灌注后可出现脑水肿，加重因缺血、缺氧引起的神经细胞损伤，并导致颅内压增高、脑疝等并发症，是中风病人早期死亡的重要原因。再灌注损伤涉及到多方面的机制，近几年研究发现[1]，基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMP)尤其是其中的明胶酶(MMP－2、MMP－9)表达的异常是脑缺血再灌注损伤的重要机制。临床实践表明脑心通在脑缺血再灌注损伤治疗中有较好的疗效，但其确切机制尚不明[2]。鉴于此，本研究旨在建立大鼠脑缺血2 h再灌注24 h模型(middle cerebral artery occlusion，MCAO)后，通过观察缺血再灌注组及脑心通用药组大鼠脑组织的病理组织学改变及MMP－2、MMP－9表达的变化以探讨脑心通在脑缺血再灌注损伤中的可能作用及机制。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1.1 动物与分组 取健康成年Sprague Dawley雄性大鼠45只，体重250 g～300 g，购自安徽医科大学实验动物中心(皖医室动第0l号)。饲养环境：温度(23～25)℃，湿度60％～70％，自然光照，复合颗粒饲料，自由饮水。将大鼠随机分成3组：假手术组(5只)、模型组(20只)、脑心通组(20只)。 　　1.2 试剂兔抗鼠MMP－2单抗、免抗鼠MMP－9单抗、S－PKit及DAB显色试剂均购自北京中山生物技术有限公司(除S－P Kit为美国Zymed公司产品外，其余均系美国Santa－Cruz公司产品)。 　　1.3　动物模型制作参照Zcalonga等[3]法，以10％的水合氯醛(3.5 mL/kg)腹腔注射麻醉大鼠，颈部正中切口，逐层分离暴露右侧颈总动脉，靠近心端结扎，远心端做切口置人2－0鱼线(头端加热呈直径约0.3 mm的圆球形)，插入约18 mm～20Hm(距颈总动脉分叉处)，鱼线。逐层缝合切口，鱼线残端留置切口外约5 mm。再灌注时，将鱼线拔出约10 mm。模型成功的标志是术后动物出现同侧Homers征及动物麻醉清醒后出现以左前肢为主的偏瘫。给药途径：脑心通治疗组给予脑心通药液灌胃(2 g/kg；给药容积0.5 mL/100 g，每天1次，连续5 d)，于第5天灌胃1 h后手术制备局灶脑缺血再灌注模型(同上述模型组)，假手术组与模型组给予等量的生理盐水。再灌注24 h后，断头取脑，大脑、小脑均行冠状切面取材，其中大脑在以视交叉为中心处冠状切面取材。假手术组大鼠不作缺血处理，也不予药物治疗，取材部位同上。 　　1.4　病理形态学　上述取材脑标本10％中性甲醛固定，石蜡包埋，5 um连续切片数张，其中1张行HE染色，其余作免疫组化检测之用。 　　1.5 S－P免疫组织化学法组织切片先行煮沸抗原修复，具体操作按说明书进行，一抗稀释度为MMP－2(1:150)、MMP－9(1:120)，最后苏木精复染。阳性对照为已知的MMP-2、MMP－9阳性切片；阴性对照为用PBS代替一抗。阳性信号为棕黄色。阳性计数：结合HE图像相应区，各组每只大鼠相应部位均选1张切片，高倍镜下取10个视野，数阳性细胞数及阳性血管数，然后取各组平均值。 　　1.6 统计学处理实验数据采用均数±标准差 　　表示，各组间比较采用γ2检验及t检验，P＜0.05为有统计学意义。 　　 　　2　结　果 　　 　　2.