老年与成年大鼠重要脏器中β1肾上腺素受体表达差异研究.docVIP

老年与成年大鼠重要脏器中β1肾上腺素受体表达差异研究 　　摘要:目的比较β1肾上腺素能受体(β1AR)在正常老年和成年大鼠重要脏器（心，肝，肾）中表达的差异。方法取正常老年（28月龄）和青年(3月龄)Wistar大鼠的心脏、肝脏、肾脏做石蜡切片，利用免疫组化染色的方法检测β1AR表达，使用分析测量图像软件ImageproPlus进行光密度值分析。结果老年组和成年组大鼠心脏、肝脏、肾脏中β1AR染色均为阳性，且各脏器中老年组β1AR的分布密度高于成年组（心脏：0.150±0.009 vs 0.22±0.119，P0.01;肝脏：0.150±0.013 vs 0.210±0.008，P0.01;肾脏： 0.160±0.006 vs 0.240±0.025，P0.01）。结论大鼠心脏、肝脏和肾脏细胞均有β1AR分布，且与成年大鼠相比，老年大鼠心脏、肝脏、肾脏中β1AR的表达显著增加。 　　关键词：青年；老年；β1肾上腺素能受体；免疫组化 　　 中图分类号：R329.2文献标识码：Adoi:10.3969/j.issn2014.06.051文章编号2014 　　 　　随着我国进入人口老龄化社会，老年多器官疾病已成为我国重大公共卫生问题之一。交感神经系统过度激活是多种慢性疾病的重要诱因。Esler等［1］研究发现，中枢交感神经激活后促使血浆中去甲肾上腺素水平升高。交感神经对机体产生的调节效应是通过神经末梢释放去甲肾上腺素作用于肾上腺素受体实现，而β1肾上腺素能受体(β1adrenoceptor,β1AR)是去甲肾上腺素的主要靶受体。在心脏，β1AR广泛分布于心肌细胞，是调节心脏活动的主要受体。另有研究报道，β1AR在肝脏星状细胞［2］、肾脏球旁细胞［3］、肾小管上皮细胞［4］也有分布。同时，Esler还发现老年交感神经系统活性较青年增加［1］。老年血液循环中高水平的去甲肾上腺素对心、肝、肾等重要脏器是否产生危害，主要取决于去甲肾上腺素的靶受体在这些脏器的分布状况。因此，本研究检测并比较老年大鼠与成年大鼠心脏、肝脏、肾脏中β1AR的分布情况，旨在为交感紧张性增加相关的老年心血管疾病及其他老年慢性疾病的研究提供新的实验依据。 　　1材料与方法 　　1.1实验动物及分组健康雄性Wistar大鼠12只，包括3月龄（成年组）6只，体重约300 g；28月龄（老年组）6只，体重约500 g。两组大鼠由山西医科大学实验动物中心提供。实验动物的使用遵循中华人民共和国卫生部令（第 55 号）医学实验动物管理实施细则以及山西医科大学实验动物管理细则，并得到山西医科大学动物保护协会的批准。 　　1.2主要试剂与仪器免疫组化试剂兔抗大鼠多克隆IgG购自Santa Cruze公司；山羊抗兔多克隆IgG、DAB显色剂均购自北京中杉金桥公司；全封闭组织脱水机（TissueTek VIP 5日本）；切片机（Leica 2235 德国）；显微镜（Leica DM6000B德国）。 　　1.3免疫组化方法大鼠用4%多聚甲醛做内固定，之后取心脏、肝脏、肾脏组织，用4%多聚甲醛做后固定；石蜡包埋，切片4 μm厚，脱蜡后，用3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶。再将切片置入柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）中，采用微波炉进行抗原修复。之后用山羊血清封闭，以减少非特异性染色。滴加兔抗大鼠β1AR一抗，4 ℃冰箱过夜；PBS洗涤后，滴加山羊抗兔IgG二抗，室温孵育30 min。DAB显色，苏木素复染，返蓝，脱水，透明，封固。在400倍电子显微镜下，在同样光强度下，同一次拍片，以保持可比性。每张切片随机取6个视野。空白对照组以0.01 mol/L PBS缓冲液代替一抗同时进行免疫组化染色，染色结果为阴性。使用分析测量图像软件ImageproPlus分析平均光密度值。 　　1.4统计学处理采用SPSS12.0软件进行统计学处理，所得数据以均数±标准差(x±s)表示。数据经正态性检验P0.1，该数据服从正态性分布采用两独立样本t检验，以P0.01为差异有统计学意义。 　　2结果 　　2.1心脏中β1AR表达在光学显微镜下观察发现：心肌细胞上β1AR阳性染色呈棕褐色，且老年组着色比成年组着色更深。老年组心脏中β1AR表达量高于成年组，差异有统计 　　1）为国家自然科学基金青年基金资助项目(No 学意义（P0.01）,提示：β1AR在老年和成年大鼠心肌细胞均呈阳性，且老年大鼠心肌的β1AR表达水平高于成年大鼠。详见表1。 　　2.2肝脏中β1AR表达在光学显微镜下观察发现：肝细胞β1AR阳性染色呈棕褐色，且老年组染色较成年组染色深。老年组肝脏中β1AR表达量高于成年组，差异有统计学意义（P0.0