半乳凝素-1与肝癌转移的相关性研究-外科学(普外)专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 中文摘要 ................................ .......... 1 HYPERLINK \l _bookmark0 英文摘要 ................................ .......... 2 引言 HYPERLINK \l _bookmark0 ................................ ............. 4 第一部分 Galectin-1 在肝癌组织中的表达与临床病理的关系 1.1 实验材料....................................................6 1.2 实验方法....................................................9 1.3 实验结果...................................................12 1.4 讨论与结论.................................................14 第二部分 Galectin-1 真核干扰质粒的构建及干扰效果的验证 2.1 实验材料...................................................15 2.2 实验方法...................................................17 2.3 实验结果...................................................21 2.4 讨论与结论.................................................23 第三部分 Galectin-1低表达及过表达肝癌细胞株的建立及肝癌转移 能力的相关性研究 3.1 实验材料...................................................25 3.2 实验方法...................................................28 3.3 实验结果...................................................29 3.4 讨论与结论.................................................33 参考文献 ................................ ......... 34 致谢 ................................ ............ 39 综述 ................................ ............ 40 摘 要 目的 1.分析临床切除的原发性肝癌标本中Gal-1的表达，并统计其与临床相关 指标的相关性；2.构建Gal-1低表达的干扰质粒，验证其干扰效果，为之后的细 胞系的构建奠定基础；3.在构建成功低表达或过表达Gal-1的真核质粒后，选取 Gal-1表达水平较高的的肝癌细胞系进行Gal-1低表达肝癌细胞构建及选取Gal-1 表达水平低的肝癌细胞系进行Gal-1过表达肝癌细胞株构建，为之后分析Gal-1 在肝癌细胞中的生物学作用奠定基础；4.在构建成功的肝癌细胞系中，分析其对 肝癌的迁移、侵袭等影响，并初步探索其机制。 方法 1.提取62例原发性肝癌临床标本，运用western blot技术分析Gal-1在这 些临床临床样本中的表达，通过灰度值分析软件分析Gal-1的灰度值，并分成高 低两组，收集整理相应的临床资料，再通过相应的统计方法分析肝癌中Gal-1与 相关临床数据的意义；2.通过文献查找相关的Gal-1干扰序列，并在此基础上合 成相应的干扰序列，利用基因重组技术，构建干扰或者过表达的真核质粒；3. 将构建好的质粒通过转染试剂转染到肝癌细胞株，并在药物筛选下，得到稳定转 染的单克隆，从而扩增得到稳定转染的细胞株；4.在构建成功的肝癌细胞系的基 础上，分析Gal-1对肝癌细胞系的迁移、侵袭等的影响，并对机制进行初步的探 讨。 结果 1.通过对62例原发性肝癌临床标本中Gal-1的量化，并分析与临床数据的 关系，发现肝癌中高表达Gal-1的临床样本较肝癌中Gal-1低表达的分化程度低、 肿瘤大、转移性高；2.通过对所构建质粒的测序及瞬转到肝癌细胞株中，构建的 真核干扰质粒序列正确，干扰效果可；3.经过药物的筛选，明确了各株细胞株的 药物筛选浓度，并成功构建了干扰效果好的细胞株；4.对干扰Gal-1细胞株的分 析，发现G