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美国红栌组培快繁灭菌措施研究 　　摘要 美国红栌的茎段为外植体，运用正交设计对美国红栌在离体初代培养过程中不同灭菌方法的灭菌效果和不同腋芽诱导方法的诱导结果进行了研究。结果表明其最佳灭菌措施为：切取美国红栌茎段→用洗衣粉上清液浸泡15min，并用毛笔刷去材料表面污垢→自来水冲洗30min→超净台上用70%酒精浸泡10s→无菌水冲洗2次→0.1%升汞溶液浸泡8min→无菌水冲洗8次→100mg/L的VC液浸泡10min→无菌水冲洗1次。 　　关键词 美国红栌；组培；灭菌措施 　　中图分类号 S687；S792.11文献标识码A文章编号1007-5739（2008）17-0017-03 　　 　　美国红栌[Cotinus coggyria（Royal purple）]为漆树科黄栌属美国黄栌（C. coggygria）的一个变种，原产于美国，系亚热带树种。美国红栌，落叶灌木或小乔木，树冠卵圆形至半圆形，小枝紫红色，叶片比普通黄栌叶片大。美国红栌，一年三季之中，叶色富于变化：初春时树体的全部叶片为鲜嫩的红色，或紫色，娇鲜欲滴；春夏之交，叶色红而亮丽；至盛夏时节，树体下部叶片开始渐渐转为绿色，但顶梢新生叶片始终为深红色，或紫色，远看彩色缤纷；而入秋之后随着天气转凉，整体叶色又逐渐转变为深红色，秋霜过后，叶色更加红艳美丽。入冬前，美国红栌叶片挂树时间长于普通黄栌，观景时间更长。美国红栌夏季开花，于枝条顶端花序絮状，有淡紫色羽毛状伸长花梗，宿存树梢较久，观之如烟似雾，故又有“烟树”之称，美不胜收。在园林绿化中宜丛植于草坪、土丘、山坡，或混植于其他树群中，尤其是点缀在长绿树群中，可保持1年常红，具有广阔的发展前景。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1材料 　　以安徽省农科院蚕桑所苗圃内发育良好的美国红栌优株茎段为试验材料。 　　1.2外植体无菌材料的建立 　　选取长势良好的美国红栌植株的一年生嫩枝，去除叶片，切成1.5～2.0cm长带节的茎段作为外植体。首先用毛笔 轻轻刷去外植体表面的灰尘，再将外植体用洗衣粉上清液浸泡15min，并用毛笔刷洗材料表面；然后用自来水冲洗0.5h后，在超净台上将外植体材料经过9种不同的灭菌方式处理，每个处理接种20瓶。灭菌方式的具体处理如表1。最后在超静台上将茎段两端切去0.5cm，并接种于培养基（MS＋6-BA 2.0mg/L＋NAA 0.1mg/L），置于相同的培养条件下[（25±2）℃、光照12h/d、光强2 000～2 500Lx]。每2d调查记录1次材料污染情况，经过2周培养后统计接种材料的灭菌效果，运用SPSS软件进行分析，从而筛选出最佳的灭菌措施。 　　为了解70%酒精、0.1%升汞和Vc 以及不同培养条件的处理对美国红栌灭菌效果的影响，本试验采用4因素3水平正交设计L9（34）（见表1），每瓶接种1个美国红栌茎段，每个处理接种8瓶，重复3次。70%酒精设置3个水平：a1（10s）、a2（20s）、a3（30s）；0.1%升汞设置3个水平：b1（6min）、b2（8min）、b3（10min）；Vc设置3个水平c1（5min）、c2（10min）、c3（20min）；培养条件设置3个水平：d1（15℃暗培养）、d2（20℃暗培养）、d3（15℃光照培养）。 　　 　　2结果与分析 　　 　　培养20d后，统计污染率、成功率、褐变指数（见表2），并进行方差分析。 　　对褐变指数进行方差分析（见表3），结果表明处理的总效应和a及d因素达到显著水平（P≤0.05），这说明在本试验中酒精的浸泡时间、培养条件对美国红栌褐变程度有显著影响，是影响褐变程度的重要因素。b和c因素的效应均未达到显著水平（P＞0.05），这说明在本试验中升汞浸泡时间和VC浸泡时间对褐变程度的影响不大，不是主导因素。进一步对a因素和d因素进行多重比较。 　　2.1酒精浸泡时间对褐变程度的影响 　　由表4多重比较得知，a因素3水平之间a1和a3水平之间差异极显著，a1和a2差异显著。从平均值看a1水平的值最高，所以在灭菌过程中对酒精浸泡时间进行筛选时应选用a1即酒精浸泡10s。 　　2.2培养方式对褐变程度的影响 　　由表5多重比较得知，d因素3水平之间d2和d1、d3水平之间差异显著，d1和d3之间异差不显著，这说明对褐变有明显影响的是温度。从平均值看d3水平的值最高，故d3最优，所以在灭菌过程中对培养条件进行筛选时应选用d3，即15℃光照培养。 　　对污染率进行方差分析结果表明（见表6），处理总效应未达到显著水平（P=0.616＞0.05），这说明在本试验中这几种灭菌措施对污染率的控制没有明显的作用。 　　由表7方差分析结果表明：处理总效应和b因素、c因素（P=0.012≤0.0