分子医学技能实验口腔粘膜细胞基因组DNA制备.ppt

材料不新鲜或反复冻融 未很好抑制内源核酸酶的活性 提取过程操作过于剧烈，DNA被机械打断 外源核酸酶污染 反复冻融 尽量取新鲜材料，低温保存材料避免反复冻融 液氮研磨或匀浆组织后，应在解冻前加入裂解缓冲液 在提取内源核酸酶含量丰富的材料的DNA时，可增加裂解液中螯合剂的含量 细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔 所有试剂用无菌水配制，耗材经高温灭菌 将DNA分装保存于缓冲液中，避免反复冻融 问题二：DNA降解 对 策 原 因 实验材料不佳或量少 破壁或裂解不充分 沉淀不完全 洗涤时DNA丢失 尽量选用新鲜（幼嫩）的材料 动植物要匀浆研磨充分；G＋菌、酵母裂解前先用生物酶或机械方式破壁 高温裂解时，时间适当延长（对于动物细胞、细菌可增加PK的用量） 低温沉淀，延长沉淀时间 加辅助物，促进沉淀 洗涤时，最好用枪头将洗涤液吸出，勿倾倒 问题三：DNA提取量少 对 策 原因 分子医学技能实验 实验课注意事项：安全、环保、规范操作 实验室卫生值日表：按实验分组顺序轮流 主要腐蚀性试剂：酚、氯仿，正确操作！！ 仪器使用规程和注意事项：离心机、微量加样枪、电泳仪；PCR仪；紫外透射检测仪 实验室操作规程及注意事项！！！ 内容：1）离心技术（视频）； 2）核酸制备与扩增(P2-12) ； 实验一  口腔粘膜细胞的基因组DNA制备 人基因组DNA制备的目的和用途