腹腔镜与传统开腹手术在直肠癌根治术中对肿瘤转移影响对比性研究.docVIP

腹腔镜与传统开腹手术在直肠癌根治术中对肿瘤转移影响对比性研究 　　【摘 要】目的：联合研究结直肠癌外周血及腹腔灌洗液细胞角蛋白（Cytekeratin 20）CK20的变化，探讨腹腔镜手术在结直肠癌手术治疗中的应用价值。方法：应用反转录聚合酶连（RT―PCR）法检测51例行根治术的结直肠癌患者的外周血及及腹腔灌洗液CK20的变化。结果：在结直肠癌根治术中，腹腔镜与开腹手术，手术前后右颈内静脉血及腹腔灌洗液检测CK20阳性表达率变化（P0.05）均无显著性差异，与TNM分期有显著相关。结论：腹腔镜直肠癌根治术不增加肿瘤扩散风险。 　　【关键词】结直肠癌根治；CK20；腹腔镜手术；开腹手术 　　【中图分类号】R735 【文献标识码】A 【文章编号】1004―7484（2013）10―0116―02 　　结直肠癌的发病率逐年上升，占全球恶性肿瘤的第三位，在我国为第四位。通过手术、化疗、放疗等其他综合治疗有一定疗效。约有40～50%的患者仍在5年内死于复发和远处转移。有学者认为：自原发肿瘤上脱落进入微细脉管循环的癌细胞是引起肿瘤转移的主要因素。在临床实际操作中，对于开腹手术难免存在对肿瘤的挤压，同时，目前的动物实验证明，在腹腔镜操作中气腹对肿瘤转移的影响，鉴于目前腹腔镜手术的蓬勃发展，其创伤小，术野暴露好，切口?痕小，术后恢复时间短的优点弥补了开腹手术的不足。因此，对于直肠癌根治术所采用以上两种方式对于肿瘤转移的影响研究有着重要意义。CK20具备独特的分布特点和表达模式[1]，被认为是检测结直肠癌微转移灶的良好指标之一。本实验通过检测结直肠癌不同手术前后的静脉血及腹腔灌洗液中的CK20，结直肠癌根治术游离癌细胞（free cancer cell FCC）与肿瘤分化程度、肿瘤分期、淋巴结转移、肿瘤位置等之间的关系。并进一步探讨腹腔镜手术对结直肠癌微转移的影响。 　　1 资料与方法 　　1.1 临床资料 　　回顾性分析2008～2013年我院收治的51例结直肠癌患者，结合患者意愿非随机选择手术方式，其中21例行腹腔镜手术，30例同期行开腹手术。两组病例资料无明显差异。入组标准：术前经肠镜及活检病理检查证实为结直肠癌，术前检查（腹部彩超、CT未发现临近器官及远处转移），均无肠梗阻及腹部手术史，术前评估均能行根治术病例。腹腔镜组由操作经验丰富的医师手术，无一例中转开腹。两组围手术期处理无差异。均接受全肠道准备，全麻下手术。 　　1.2 标本采集 　　术前右颈内静脉置管，从静脉导管抽10ml静脉血，再抽第二个静脉血，肝素抗凝。第一个10ml回推。手术结束时同样方法采集标本。同时收集开腹后（或建立气腹后）和关腹前两次腹腔灌洗液，均于腹腔注入200ml生理盐水，轻轻搅动后于盆腔吸取50ml。 　　1.3 实验方法 　　1.3.1总RNA提取 　　所取标本均采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离单核细胞。总RNA提取采用Trizol法（北京博大泰克生物基因技术有限公司），操作步骤按照其说明书进行。 　　1.3.2 PT-PCR 　　上海生工生物工程技术服务有限公司合成引物序列。CK20 mRNA 引物： 　　A，5’-CAGACACACGGTGAACTATGG-3’； B，5’-GATCAGCTTCCACTGTTAGACG-3’； 　　内对照B-action的引物碱基序列： 　　5’-ATCTGGCACCACACCTTCTACAATGAGCTGCG-3’； 　　5’-CGTCATACTCCTGCTTGCTGATCCACATCTGC-3’ 　　按PT-PCR试剂盒（北京博大泰克生物基因技术有限公司）说明，在反应系统中加入总RNA 2微克置于42℃孵育120分钟，95℃条件热浴5分钟。将RNA反转录成cDNA。PCR反应条件按 94℃ 50s ；65℃ 50s；72℃ 60s 循环32次，最后72℃ 延伸8min。 　　1.3.3 结果分析 　　PCR及B-action扩增后产物，经含EB染色剂的2%琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像分析系统照相并对图像进行分析，得出CK20表达的阳性率情况，并与临床常规病理结果比较，进行统计学分析。 　　1.4 统计学分析 　　所有数据均采用SPSS10.0软件采用x2检验进行统计学分析，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　确定外周血及灌洗液有其一为阳性者为阳性。临床资料与腹腔镜组和开腹组CK20阳性表达结果见下表： 　　其中21例腹腔镜组术前、术后CK20阳性表达率分别为33.3%、47.6%，30例开腹组术前、术后CK20阳性表达率分别为33.3%、43.3%，总的CK20阳性表达率为39.2%。术后较术前CK20阳性表达率均有增加，但同术前无显著性差异，