舒郁散对慢性应激抑郁大鼠行为及海马神经肽表达影响.docVIP

舒郁散对慢性应激抑郁大鼠行为及海马神经肽表达影响 　　摘要：目的 观察舒郁散对慢性应激抑郁大鼠的行为变化、脑组织肿瘤坏死因子（TNF-α）含量及海马神经肽表达的影响，为临床治疗提供实验依据。方法 50只大鼠随机分为正常组、模型组、盐酸氟西汀组及舒郁散小、大剂量组，各治疗组给予相应药物，正常组与模型组给予等容积蒸馏水。应激刺激造模，采用糖水消耗实验、悬尾实验观察大鼠行为改变，采用ELISA检测脑组织TNF-α含量，免疫组化法观察大鼠海马神经肽表达。结果 盐酸氟西汀、舒郁散大剂量组大鼠悬尾不动时间明显减少，糖水消耗量明显增加，与模型组比较差异有统计学意义（P0.05）。盐酸氟西汀、舒郁散大剂量组大鼠脑组织TNF-α含量显著降低，与模型组比较差异有统计学意义（P0.05）。盐酸氟西汀组、舒郁散大剂量组海马神经肽免疫反应阳性神经元数目减少，平均光密度降低，与模型组比较差异有统计学意义（P0.05）。结论 舒郁散具有抗抑郁作用，其作用与剂量呈正相关。 　　关键词：舒郁散；抑郁症；动物行为；肿瘤坏死因子-α；神经肽；大鼠 　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）04-0046-03 　　抑郁症是一种以显著而持久的心境低落为主要特征的临床综合征，抑郁症患者存在与应激紧密相关的炎性应答和氧化应激过度激活现象，表现为肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量增高[1]。海马为大脑边缘系统的重要组成部分，海马与许多高级神经活动行为反应以及植物性神经功能密切相关，应激能引起神经肽分泌，神经肽的抗应激作用明显超过其他内源性化合物[2]。舒郁散具有疏肝理气、养心安神解郁之功效，可改善抑郁患者的临床症状；能调节抑郁大鼠脑神经递质及海马5-羟色胺受体表达而发挥抗抑郁的作用[3]。本研究观察舒郁散对慢性不可预见性应激（CMUS）抑郁大鼠行为、脑组织TNF-α含量及海马神经肽表达的影响，为临床治疗提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 　　50只SPF级Wister大鼠，中国人民解放军总医院医学实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK（京） 2011-0005，体质量180～220 g。 　　1.2 药物 　　舒郁散由酸枣仁、郁金、栀子、五味子、炙麻黄组成，上药浸泡、煎煮，过滤，于80 ℃恒温水浴中浓缩成含原药材量5 g/mL药液，存冰箱备用，使用时用蒸馏水稀释灌胃；盐酸氟西汀片，礼来苏州制药有限公司分装，批号3021A。 　　1.3 试剂与仪器 　　TNF-α放免试剂盒，中国人民解放军总医院东亚免疫技术研究所生产；神经肽多克隆抗体（北京博奥森生物技术有限公司，批号990901W），二抗显色试剂盒：EnVision Detection Kit，基因科技（上海）有限公司产品（Code No.GK500705）。全自动真空脱水机（LEICAASP300）、组织包埋机（LEICA EG1140H）、石蜡切片机（LEICA RM2135）、展片机（LEICA HI1210），德国LEICA公司；光学显微镜，日本OLYMPUS BX60系统显微镜；酶标仪THERMO MultiskanMK3（美国）。Image-proplus 5.1显微图像分析系统。 　　1.4 分组与给药 　　实验大鼠随机分为正常组、模型组、盐酸氟西汀组和舒郁散小（0.5 g/mL）、大（5.0 g/mL）剂量组，每组10只。盐酸氟西汀组每日灌服盐酸氟西汀药液1.8 mg/kg，相当于70 kg成人常规临床用药的等效量；舒郁散小、大剂量组给予相应舒郁散灌胃，每次1 mL，正常组和模型给予等容积蒸馏水灌胃，连续21 d。正常组每笼饲养5只，其他组每笼饲养1只。 　　1.5 造模 　　大鼠进行21 d应激刺激，包括摇晃5 min，禁水24 h、禁食24 h，夹尾1 min，电击足底（每次10 s，间隔1 min，共计30次），冰水游泳5 min，噪音刺激，转换昼夜节律24 h，制动，热刺激40 ℃、5 min，每日刺激1次，每次平均接受2种刺激[4]。 　　1.6 动物行为学检测 　　悬尾实验（TST）参照Steru[5]方法，将大鼠尾端4 cm的部位固定在一根水平木棍上，使大鼠呈倒挂状态，其头部离水平面5～6 cm，用木板隔开相邻大鼠的视线，记录每只大鼠在5 min内不动时间；实验后用酒精清除箱内上一只大鼠留下的残留物和气味，防止对其他大鼠行为造成影响。糖水消耗实验（SPT）：实验前给大鼠正常的水和食物供应，实验开始时移去所有食物和水，将大鼠单独成笼，每个笼子中央紧靠着放体积相同的1%蔗糖水和自来水各1杯，在5 h内让大鼠自由摄水。为了防止大鼠对某侧的蔗糖水或自来水形成特殊的偏好，5 h后交换蔗糖水和自来水的位置。