花脸香蘑发酵全液多糖提取条件研究.docVIP

花脸香蘑发酵全液多糖提取条件研究 　　摘要:采用热水浸提法,以粗多糖得率作为评价指标,通过单因素试验和正交试验,对花脸香蘑[Lepista sordida (Fr.) Sing.]菌丝体发酵全液中多糖的提取条件进行优化。结果表明,优化的提取条件为:提取温度100 ℃、提取次数3次、pH 12、乙醇终浓度70%;在此优化条件下,花脸香蘑发酵全液的粗多糖得率达4 mg/mL。 　　关键词:花脸香蘑;发酵全液;多糖;提取条件 　　 　　花脸香蘑[Lepista sordida (Fr.)Sing.]属于担子菌亚门(Basidiomycomycotina),层菌纲(Hymenomycetes),伞菌目(Agaricales),口蘑科(Tricholomataceae),香蘑属(Lepista),又名紫晶香蘑、花脸蘑和紫花脸香蘑等,在中国主要分布于山东、黑龙江、河北、甘肃、青海、四川等地,气味浓香,是一种味道鲜美的食用菌[1]。罗心毅等报道在人工代料栽培的花脸香蘑子实体中富含人体抗自由基、抗衰老、抗癌等微量元素[2]。1996年MAZUR等从花脸香蘑发酵菌丝体中提取、分离得到两种二萜骨架化合物,并进行了结构鉴定及生物活性研究[3];而针对花脸香蘑发酵全液多糖提取条件的研究尚未见报道。本研究采用热水浸提法,以粗多糖得率作为评价指标,对花脸香蘑发酵全液多糖的提取条件进行优化,为花脸香蘑多糖提取研究奠定基础。 　　 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1材料 　　1.1.1供试菌株 　　花脸香蘑623菌株系青岛农业大学药用真菌研究所提供。 　　1.1.2培养基 　　平板培养基:玉米面10 g ,酵母膏2 g,琼脂20 g,水1 000 mL,pH自然。 　　液体培养基:玉米面10 g ,酵母膏2 g,水1 000 mL,pH自然。 　　1.2发酵全液制备 　　 　　平板培养基中心点接种直径8 mm斜面菌种,27 ℃培养至菌丝体较致密并呈现紫色时,得活化菌种。 　　采用直径8 mm的打孔器取活化菌种,接种于装有200 mL液体培养基的500 mL三角瓶中,150 r/min、27 ℃培养,直至发酵液不再浑浊,菌球密度适中,获得液体菌种。 　　再取液体菌种接种于液体培养基中,接种量为5%,其它培养条件同液体菌种制备,培养6 d,得供试发酵全液。 　　1.3多糖提取基本条件 　　发酵全液经剪切乳化机打碎后,用1 mol/L NaOH调节发酵全液pH至12,100 ℃沸水浸提1 h,6 000 g离心10 min,上清经沸水水浴浓缩至原体积的1/10,加入无水乙醇使乙醇终浓度达80%,静置24 h后,离心(6 000 g,10 min),醇沉物经50 ℃恒温干燥箱干燥,得粗多糖,蒽酮-硫酸法[4]测定多糖含量,计算粗多糖得率。 　　1.4单因子试验 　　 　　1.4.1pH 　　用1 mol/L HCl、1 mol/L NaOH调发酵全液pH分别至4、5、6、7、8、9、10、11和12,其它提取条件、后续测定操作同1.3。 　　1.4.2温度 　　提取温度分别设为80 ℃、90 ℃和100 ℃,其它提取条件和后续测定操作同1.3。 　　1.4.3乙醇终浓度 　　乙醇终浓度分别设为70%、80%和90%,其它提取条件和后续测定操作同1.3。 　　1.4.4提取次数 　　提取次数分别设为1次、2次和3次,其中1次提取的具体条件和操作同1.3;2次提取试验是在基本提取条件下提取1 h后,离心(6 000 g,10 min),取上清,沉淀加入水(1/2原提取液体积),重复提取过程,合并两次上清,后续操作同1.3;3次提取按2次提取方法增加提取1次。 　　 　　1.5正交试验 　　在单因素试验基础上,以粗多糖得率为考察指标,采用L9(34)正交试验表对提取温度、提取次数和乙醇终浓度3个因素进行优化。试验因素水平设计见表1。 　　1.6数据处理 　　使用DPS数据处理软件和正交实验设计助手ⅡV3.1分别对单因素试验和正交试验粗多糖得率进行方差分析。 　　 　　2 结果与分析 　　 　　2.1单因素试验结果 　　2.1.1pH对粗多糖得率的影响 　　试验结果(图1)表明,pH对粗多糖得率有显著的影响,在供试的酸性和碱性条件下,粗多糖得率高于其它中性和弱碱性条件,在pH 6～12范围内,随着pH的升高,粗多糖得率增高,在供试pH范围内,pH 12的粗多糖得率最高,为2.88 mg/mL,极显著高于其它pH条件下的得率(P0.01)。 　　2.1.2温度和乙醇终浓度及提取次数对多糖得率的影响 　　由表2可知,在供试范围内,提取温度、酒精终浓度和提取次数分别以100 ℃、80