基因分析技术 2016.ppt

* 三、焦磷酸法(Pyrosequencing) 新一代DNA序列分析技术，该技术无须进行电泳，DNA片段也无须荧光标记，操作极为简便，可以快速、准确地测定一段较短的目标片段。 双磷酸酶 （降解剩余ATP） 硫酸化酶 荧光素酶 APS+PPi Luciferin+ATP * 四、高通量测序 （High Throughput Sequencing） 又称下一代测序（Next Generation Sequencing，NGS） 主要平台： 1.罗氏(Roche)的454测序仪（Roch GS FLX Sequencer） 2. Illumina的Solexa基因组分析仪（Illumina Genome Analyzer） 3. ABI的SOLiD测序仪（ABI SOLiD Sequencer） * 1. 将目标DNA剪切为小片段 2. 单个小片段DNA分子结合到固相表面 3. 单分子独立扩增 4. 每次只复制一个碱基（A,C,T,G）并检测信号 5. 高分辨率的成像系统 三个厂家的高通量测序仪器原理上的共同之处 * 甲基化检测 高通量测序 重点掌握： 一、多种核酸/蛋白印记杂交的概念、原理、影响因素、种类 二、核酸探针的定义、种类、标记方法 三、PCR的定义、反应步骤、反应体系（尤其是酶）、引物的设计、常用PCR的分类 四、生物芯片的定义、检测原理和优势 四、测序的定义、经典方法的反应体系及其原理 * 谢谢！ * * * ?Eastern Blotting?是一种检测蛋白质翻译后修饰?的技术，其检测目标是蛋白质上特定的修饰基团或部位，如脂肪酸链、糖基、磷酸化的氨基酸等等。在Eastern Blotting实验中，通常要先用2D电泳将蛋白质分离，然后转到膜上，再用特异的探针去检测。蛋白质的翻译后修饰是蛋白质执行功能过程中普遍存在的调控手段！ Far-western blotting?是一种基于western blotting的分子生物学方法，在western blotting中用抗体来检测目标蛋白，而在far-western blotting中用能够与目标蛋白结合的非抗体蛋白质。因此，western blotting用来检测特定的蛋白而far-western blotting则用于检测蛋白质之间的相互作用。 * * 最早出现的blotting技术是Southern Blotting，它是检测DNA的一种方法。这项技术由英国生物学家Edwin Southern在20世纪70年代发明，科学界便以发明者的名字来命名这项技术------Southern Blotting。 * 1977年，美国斯坦福大学的James Alwine，David Kemp，和George Stark在PNAS上发表文章，提出了类似于Southern Blotting，但却是用来检测RNA的技术。由于跟Southern Blotting比较相近，于是便有了Northern Blotting这个名称。后来，George Stark又发明了用于检测蛋白质的blotting技术，W. Neal Burnette玩了一把“文字游戏”将这项技术命名为Western Blotting，这个名字很快也被广泛接受并流行起来。???????? * /insitu.html * ???Eastern Blotting?是一种检测蛋白质翻译后修饰?的技术，其检测目标是蛋白质上特定的修饰基团或部位，如脂肪酸链、糖基、磷酸化的氨基酸等等。在Eastern Blotting实验中，通常要先用2D电泳将蛋白质分离，然后转到膜上，再用特异的探针去检测。蛋白质的翻译后修饰是蛋白质执行功能过程中普遍存在的调控手段！ Far-western blotting?是一种基于western blotting的分子生物学方法，在western blotting中用抗体来检测目标蛋白，而在far-western blotting中用能够与目标蛋白结合的非抗体蛋白质。因此，western blotting用来检测特定的蛋白而far-western blotting则用于检测蛋白质之间的相互作用。 * * * 但由于测序和引物合成的困难，以及70年代基因工程技术的发明使克隆基因成为可能，所以，Khorana的设想被人们遗忘了…… * * * 与mRNA相同的引物为正义引物，而与其互补的是反义引物。所以上游引物对应的是正义引物，下游引物对应的是反义引物。 * http://www.pps.tv/w_19rt9ixcj5.html * * 特异性强 灵敏度高 简便快捷 对样品要求低 （四）PCR的反应特点 * 二、PCR体系的基本组成成分 模板DNA 特异性引物 耐热性DNA聚合酶 dNTP