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实验一 实验动物分组、标记与染毒方法 2013.11 强调事项 动物实验安全 实验纪律要求 一、目的意义 实验动物科学的分组、标记和合理的染毒，是取得良好试验结果和结论的前提，也是每一项毒理学试验首先要做的工作。 通过本试验学习实验动物的科学分组、标记和常用基本染毒技术。 二、内容 1. 健康实验动物的选择和性别鉴定。 2. 实验动物的分组。 3. 实验动物的标记。 4. 实验动物的染毒技术。 三、材料和试剂 1. 实验动物：成年健康的小白鼠和大白鼠。 2. 染料：结晶紫、苦味酸、品红。 3. 毛笔或棉签。 4. 天平。 四、实验方法和步骤 （一）健康动物的选择和性别鉴定 1. 健康动物外观体型丰满，被毛浓密有光泽、紧贴体表，行动迅速，反应灵活，饮食与营养状况良好。重点检查： 1）眼睛：明亮、瞳孔双侧等圆，无分泌物； 2）耳朵：耳道无分泌物流出，耳壳无脓疮； 3）鼻子：无浆性黏液分泌物，无喷嚏； 4）皮肤：无创伤、无脓疮、疥癣、湿疹； 健康动物的选择 5）颈部：端正、如有歪斜可能內耳有疾患，应废弃； 6）消化道：粪便成型，肛门附近被毛干净； 7）神经系统：无震颤、麻痹。大、小鼠若出现圆圈动作或提尾倒置呈圆圈摆动，应废弃； 8）四肢及尾巴：四肢、手脚趾及尾无红肿和溃疡。 大、小鼠的性别鉴定 大、小鼠 1. 根据形态鉴定日龄（大、小情况基本一样） 2. 根据体重鉴定日龄 ⑴ 小鼠日龄与体重的对应 （二）称重、分组与标记 1. 随机数字分组法 （1）称重：大小鼠的称重，天平感应量应在0.1g以下。 （2）随机分组：为了得到客观的剂量-反应关系，应将一群动物依照统计学的原则随机分配到各实验组中去，可按随机数字表方法进行，举例说明如下： 随机数字方法分组 设将30只雄性动物平均分成A，B，C，D，E，F六组，每组5只动物。将已编好号的动物依号码用随机数目表分配。如选随机数字表第二行，从第—个数目开始，依次抄下30个数目（依横行、纵行、甚至斜行抄录均可）。将各数目一律以组数除6、以余数1，2，3，4，5，0代表应分配于A，B，C，D，E，F各组的动物。结果如表1-2（从第二行随机数表开始）。 分组结果 随机数字方法分组 为使各组动物数均达5只，再依随机分配原则选出A组2只，C组1只给D组；B组选2只，F组选1只给E组。为此，继续抄下随机数字分别除以A、B、C、F各组动物数。计算如下：56／7除尽，即将A组第7只动物(25号)给D组；50／6，余数为2，即将A组第2只动物(4号)给D组；26／6余数为2，即将C组第2只动物(9号)给D组。类推，最后调整分组如附表1-3。雌性动物也依此法分组。然后将雌、雄动物合组进行试验。 随机区组分组法 将雌雄各30只18-22g的小白鼠分别用随机区组法分为6个组。 ①准备9个饲养笼，依次标明18，18.5，19，……22g，将30只小鼠按体重放入相应笼内。 ②准备6个饲养笼，依次标明1组，2组……6组。再将6个小球珠标上1，2，3，4，5，6。 ③组内小鼠编号。用饱和苦味酸(黄色)酒精溶液。如果再同时使用复红(红色)的饱和酒精液，即可标记1-100号。 ④将球珠在盒内摇动后，任意拾起一个。如该球珠是5，则从18g笼中任意抓—只小鼠，作为5组1号，用苦味酸标上1号，放入5号饲养笼，并做好记录(x组y号zg)。再拾起第二颗球珠，如上法抓鼠编号。如此拾完5颗小球珠，每组均分得小鼠1只(全为1号)。 ⑦重新混匀6个小球珠，按上述方法将每组的2，3，4，5号鼠分别编组。 ⑥在各组笼上挂上剂量牌，注名性别、组号、剂量及每只小鼠实际灌胃量。 3．编号及标记 实验动物分组后，为了区分、 观察并记录每个个体的反应情 况，必须给每只动物进行编号 标记。 ①体表颜料着色法：一般对短 期试验的白色动物，可用颜料 涂搽被毛的方法标记。常用的 涂染化学药品有： 红色：0.5%中性红或品红溶液； 黄色：3%～5%苦味酸溶液或80%～90%苦味酸酒精饱和液； 咖啡色：2%硝酸银溶液； 黑色：煤焦油酒精溶液。 3．编号及标记 ②剪耳法 ：在耳缘剪口为号，常以右耳代表个位，左耳代表十位。或配合染色法，右耳代表十位，左耳代表百位。右耳草缘颞侧剪一口为1号，右耳耳缘近背部剪口为2号，耳缘中间剪“V”字形口为5号，左耳耳缘相应部位分别为10，20及50号。 也可用缝针穿7孔或剪刀剪口、穿孔或剪口后，即用棉球蘸上溶解在酒精里的黑墨涂抹，使黑液渗入孔口中，不易脱失。此法可由1号标至99号。左耳标记十位，右耳标记个位。 3．编号及标记 ③号牌法 用金属做的号牌，固定于实验动物身上或系于动物颈或腿部，