针灸对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜形态学及GH IGFI表达影响.docVIP

针灸对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜形态学及GH IGFI表达影响 　　马晓?　桑小宁　吴焕淦　施　征　刘慧荣　王晓梅 　　摘　要：目的：探讨针灸大肠下合穴上巨虚对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜形态学及生长激素(GH)、胰岛素样生长因子－I(IGF－I)表达的作用。方法：采用免疫法加局部刺激制备UC大鼠模型，随机将大鼠分为模型组、隔药灸组、电针组，并与正常大鼠作对照。隔药灸组、电针组选取上巨虚穴分别进行隔药灸、电针治疗，连续治疗14次。治疗结束后采用光、电镜观察肠黏膜形态学变化；应用免疫组化法检测结肠GH、IGF－I蛋白表达。结果：UC大鼠结肠光镜观察可见溃疡形成和炎症，电镜观察可见结肠黏膜上皮细胞绒毛脱落短小缺损，胞膜损伤。线粒体肿胀，嵴消失，高尔基体囊泡较少，杯状细胞膜严重受损，胞内没有黏液颗粒；结肠GH、IGF－I蛋白表达增高。隔药灸组、电针组经过治疗后，结肠黏膜病理损伤减轻；结肠GH、IGF－I蛋白表达降低，趋于正常。结论：隔药灸、电针上巨虚穴均能明显改善UC大鼠结肠黏膜病理损伤，保护肠黏膜，促进肠黏膜机械屏障的修复：UC大鼠结肠GH、IGF－I表达增高，隔药灸、电钟上巨虚穴均能促进结肠异常增高的GH、IGF－I的表达趋于正常。 　　关键词：溃疡性结肠炎；肠黏膜；生长激素；胰岛素样生长因子 　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673－7717(2007)07－1362－04 　　 　　溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis，UC)又称慢性非特异性溃疡性结肠炎，是一种反复发作的原因不明的肠道慢性非特异性炎症和溃疡性病变，本病病位主要在大肠黏膜及黏膜下层，病理表现以溃疡糜烂为主，多累及远端结肠，亦可遍及全部结肠。在其反复发作过程中还可导致肠道纤维化和狭窄的形成。而且UC患者的结、直肠癌的发病率也显著高于一般人群。研究表明，UC的发生、发展与肠黏膜屏障功能长期慢性的损伤有密切关系，UC患者肠黏膜屏障的各个环节包括物理屏障、化学屏障、免疫屏障、生物屏障，都存在着不同程度的损伤。生长激素/胰岛素样生长因子－l(growth factor－insulin Hke growth factor．GH/IGF－I)轴的调节功能在肠黏膜屏障损伤过程中具有重要的作用。本试验旨在从形态学角度观察针灸大肠下合穴上巨虚对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜屏障损伤的影响，探讨溃疡性结肠炎大鼠结肠GH/IGF－I轴的变化及针灸上巨虚的干预作用，为“合治内腑”理论提供实验依据。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1．1　实验动物 　　由上海中医药大学实验动物中心提供的雄性SD大鼠共40只(质量合格证号：沪医动证字05号)，体重(1加±20)g，随机分为造模组(30只)和正常组(10只)。 　　1．2　模型制备 　　参照《药理实验方法学》，应用免疫学方法，并加局部刺激制备溃疡性结肠炎大鼠模型。采用溃疡性结肠炎患者术后新鲜结肠黏膜，加适量生理盐水制成黏膜匀浆，冷冻24h，冻溶后以3000r/min离心30min，取上清液提纯测定蛋白质含量，并与Freund佐剂混合配成乳剂。造模组大鼠首次每只足趾内注射抗原6mg，并在10、17、24、31天分别于足趾、背部、腹股沟、腹腔内注射抗原12mg(末次注射不加Freund佐剂)。至血清抗结肠抗体达到一定效价，对造模组大鼠用2％戊巴比妥钠30mg/kg体重行腹腔麻醉，用3％福尔马林2mL灌肠，留置1h，以生理盐水洗净后排出，再用抗原液(12mg/mL不加佐剂)2mL灌肠，留置2h，洗净排去。正常SD大鼠为正常组，用生理盐水做与造模组相同处理。 　　造模结束后，分别随机选取正常组2只、造模组大鼠6只，作HE染色确定模型是否成功。在确定模型制备成功的基础上，将造模组大鼠随机分为模型组、隔药灸组和电针组。 　　1．3 分组与治疗 　　1．3．1 正常组正常大鼠，做与隔药灸组相同的固定。 　　1．3．2 模型组不作任何治疗，只做与隔药灸组相同的固定。 　　1．3．3 隔药灸组取穴上巨虚。穴位定位根据《实验针灸学》(林文注，1994年)。药饼配方：附子、肉桂等。艾炷：大小约90mg。每日隔药饼灸1次，每次每穴灸2壮，连续治疗14天。 　　1．3．4 电针组取穴上巨虚。穴位定位同隔药灸组。用韩氏神经穴位刺激仪，深度0.2－0.3cm，疏密波，频率2/50Hz,20mins，每日1次，连续治疗14天。 　　治疗结束后，将正常组、模型组、隔药灸组、电针组大鼠颈椎脱位处死，剖开腹腔，割取远端结肠2－3cm，用于指标检测。 　　1．4　检测指标与方法 　　1．4．1　形态学观察HE染色，光镜观察组织病理学变化；透射电镜观察大鼠结肠黏膜屏障超微结构的变化。 　　1．4．2　结