钙铁和锰对两种灵芝液体培养菌丝体生物量影响.docVIP

钙铁和锰对两种灵芝液体培养菌丝体生物量影响 　　摘要：探讨了水中不同含量的钙、铁、锰离子对赤芝（??Ganoderma lucidum??）和松杉灵芝（??G. tsugae??）液体培养下菌丝体生物量的影响。结果表明，在200~1200 mg/L时随着Ca浓度增加赤芝生物量逐渐减少，而松杉灵芝在Ca浓度为200 mg/mL时生物量最高，在600~1200 mg/mL低于不添加Ca的处理；在Fe浓度为??200~??600 mg/L及200~800 mg/L时, 赤芝和松杉灵芝的生物量高于不添加的处理，但当浓度超过相应范围时，这两种灵芝的生物量显著降低；Mn浓度为200或400 mg/L时，两种灵芝的生物量较高，当浓度超过??800 mg/L??时低于不添加的处理。?? 　　关键词：赤芝； 松杉灵芝； 钙离子； 铁离子； 锰离子； 液体培养 　　 　　 　　灵芝是一种名贵的药用真菌，具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒等功效，采用液体发酵的方法获得灵芝有效成分，具有很好的工业化应用前景［1,2］，另外，灵芝具有富集金属元素的特性，可将无机态的钙、铁等营养元素转化成有机态以利于人体吸收［3］，但不同灵芝耐金属元素的特性不同［4］，因此，笔者研究了水中一些常见离子（钙、铁、锰）对赤芝（??Ganoderma lucidum）??和松杉灵芝（??Ganoderma tsugae??）液体培养菌丝体生物量的影响，以期为灵芝的液体发酵生产提供参考。?? 　　1 材料与方法 　　1.1??菌种 　　 赤芝（?┆?G. lucidum??） ??0801菌种由韶关学院英东生命科学学院微生物学实验室提供，松杉灵芝（??G. tsugae??）GL-YW菌种由广东省微生物研究所提供。?? 　　1.2??供试水样 　　 用CaCl????2??、FeSO????4??#8226;7H????2??O、MnSO????4??#8226;H????2??O按0、200、400、600、800、1000和1200 mg/L 7个浓度分别配制不同钙、铁和锰含量的水(pH自然)。每个浓度重复3次。?? 　　1.3?ε嘌?基配制 　　 用蒸馏水配制PDA培养基［5］和一级摇瓶培养基［6］。用上述不同钙、铁和锰含量的水配制二级摇瓶培养基［6］。?? 　　1.4?ε嘌?方法 　　 将菌种接入PDA斜面，28 ℃培养7 d，取??0.5 cm??×0.5 cm菌块接于一级摇瓶培养基中（250 mL三角瓶，装液量100 mL），28 ℃，??160 r/min??培养6 d，制成液体菌种。将液体菌种接于二级摇瓶培养基中（250 mL三角瓶，装液量100 mL），接种量10%（v/v），28 ℃，160 r/min培养6 d。?? 　　1.5??菌丝生物量的测定 　　 将发酵液于2220 ??g??离心20 min，去上清，沉淀用蒸馏水反复清洗，滤纸过滤，待滤液无色透明后收集菌丝体，80 ℃烘至恒重，记录菌丝体生物量。?? 　　2 结果与分析 　　2.1?Ω评胱佣粤街至橹ゾ?丝体生物量的影响 　　 在试验浓度范围内，随着水中钙含量的增加，赤芝菌丝体的生物量逐渐减少。钙含量在??0~??400 mg/L时，松杉灵芝菌丝体的生物量高于不含钙的处理，但当水中钙含量大于200 mg/L时，随着钙含量的增加，菌丝体的生物量逐渐减少（图1）。?? 　　2.2?μ?离子对两种灵芝菌丝体生物量的影响 　　 水中铁离子含量在200～600 mg/L和200～??800 mg/L??的范围内，随铁含量的增加赤芝和松杉灵芝菌丝体的生物量逐渐增加，当超过??600 mg/L??和800 mg/L时，菌丝体的生物量逐渐减少。?? 　　 　　2.3?γ汤胱佣粤街至橹ゾ?丝体生物量的影响 　　 　　 当水中锰离子浓度在200或400 mg/L时，赤芝和松杉灵芝的菌丝体生物量大于不含该离子的处理，在400 mg/L时，两种灵芝菌丝体生物量最大，之后随锰含量增加生物量逐渐减少。?? 　　3 讨论 　　 已有研究表明，在食药用菌培养基中添加一定浓度的钙、铁、锌、镁、铜、锰等离子有利于菌丝体的生长及获得较高的产量，而金属离子促进菌丝生长和代谢机制方面的研究鲜有报道［7-9］。熊艳森等的研究表明，液体培养灵芝时，当钙离?┳优í?度为50 μg/mL时菌丝生物量最高，为??200 μg/mL??时，发酵液中胞外多糖和菌丝体中钙含量最高，而亚铁离子浓度为1200 μg/mL时菌丝生物量最高，在1000 μg/mL时胞外多糖和菌丝体中铁含量最高［3］。本试验结果表明，这3种离子在一定的浓度范围内能促进菌丝体的生长（钙对赤芝的影响除外），但赤芝和松杉灵芝对不同离子的敏