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银杏内酯对CCl4诱导小鼠肝损伤作用研究 　　[摘要] 目的 探讨银杏内酯对CCl4诱导的小鼠肝损伤的保护作用及其机制。 方法 随机将50只SD小鼠分为5组，分别为空白对照组、模型组、银杏内酯低剂量组、银杏内酯中剂量组和银杏内酯高剂量组。采用CCl4腹腔注射和灌胃制作小鼠肝损伤模型。通过观察肝脏的解剖学形态，检测血丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平来评估银杏内酯对小鼠肝脏的保护作用。Real time-PCR检测孕烷X受体（PXR）、CYP3A11、CYP3A13和RXRα的表达。结果 与空白对照组相比，模型组小鼠肝脏表面粗糙、轮廓萎缩；血清ALT和AST水平明显升高。与模型组相比，银杏内酯组小鼠肝脏表面光滑、轮廓清晰；血清ALT和AST水平明显降低，肝脏PXR、RXRα、CYP3A13和CYP3A11表达水平明显升高。结论 银杏内酯对CCl4诱导的小鼠肝损伤有一定的保护和修复作用，其保护效果呈明显剂量依赖性。PXR、RXRα、CYP3A13、CYP3A11基因表达的上调可能在小鼠肝损伤保护中起重要作用。 　　[关键词] 银杏内酯；CCl4；肝损伤 　　[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）02（b）-0011-04 　　银杏叶提取物主要成分为黄酮类和内酯类化合物，其中内酯类化合物包括银杏内酯A、B、C、M、J。银杏内酯具有抗炎、抗氧化、抗过敏等药理作用，可治疗消化系统、中枢系统、呼吸系统、泌尿系统等疾病[1-3]。目前肝脏损伤的预防和治疗是全球范围的一个严峻课题。目前临床主要通过建立和应用与人类肝脏发病机制类似的动物模型，来探讨各种肝脏疾病发病机制和筛选各种治疗药物[4]。 　　孕烷X受体（PXR）是一种体内内源和外源性物质代谢过程中的调节因子，它能够被许多内源性物质激活，包括孕烷、胆汁酸、维生素和激素[5]。随着小鼠和人的PXR基因首次成功克隆，研究发现PXR不仅能够被目前熟知的许多调节CYP3A表达的化合物所激活，还能结合到许多CYP3A基因启动子区域的响应元件上[6-8]。研究表明，银杏内酯能激活小鼠体内PXR，进而抑制人肝脏成纤维母细胞的增殖[9-11]。RXRα、CYP3A11和CYP3A13在功能上与PXR密切相关，但是这三种细胞因子与小鼠肝损伤相关的研究报道较少。本文研究银杏内酯对CCl4诱导小鼠肝损伤后肝功能的影响，初步探讨银杏内酯在CCl4诱导的小鼠肝损伤中的作用机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 　　实验动物：SD雄性小鼠，重18～22 g，购自吴氏实验动物中心。主要试剂：银杏内酯购自临沂爱康药业有限公司，Real time-PCR试剂盒购自大连宝生物公司，ALT和AST检测试剂盒购自上海复星长征公司，逆转录试剂盒购自大连宝生物公司。主要仪器：全自动凝胶成像分析系统（JS-380A型，上海培清科技有限公司），荧光定量PCR扩增仪（TP800，大连宝生物公司），倒置显微镜（XDS-1B型，重庆），全自动生化分析仪（迈瑞BS200，中国迈瑞公司），离心机（1-15，德国STARTORIUS公司），荧光定量PCR扩增仪（TP800，TAKARA）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 动物分组 将50只SD雄性小鼠随机分为5组：空白对照组、模型组、银杏内酯低剂量组、银杏内酯中剂量组、银杏内酯高剂量组，每组10只。 　　1.2.2 给药方法 银杏内酯低、中、高剂量组小鼠每天分别采用银杏内酯0.3、0.6、1.2 g/kg灌胃，连续2周，第15天隔夜禁食后，模型组和银杏内酯组小鼠腹腔注射0.2%CCl4橄榄油溶液0.02 ml/g，空白对照组注射等剂量橄榄油，48 h后处死。 　　1.2.3 血清AST和ALT活性测定 处死小鼠前眼球取血，离心获得血清，用ALT、AST检测试剂盒进行检测。 　　1.2.4 形态学观察 解剖观察小鼠肝脏形态、色泽，取5 mm×5 mm×3 mm大小的肝组织，制作石蜡切片，进行HE染色，观察小鼠肝组织形态结构、坏死程度和炎症等。 　　1.2.5 Real Time-PCR检测 提取小鼠肝脏总RNA，逆转录获得第一链cDNA，采用Real time-PCR检测RXRα、PXR、CYP3A11、CYP3A13表达情况，各引物序列见表1。PCR反应体系：2.5×SYBR Mix 12.5 μl，10 μmol/L上下游引物各0.5 μl，模板2.0 μl，ddH2O 9.5 μl，共25μl。 　　表1 RT-PCR实验中各基因的检测引物序列 　　1.3 统计学方法 　　采用SPSS 13.0进行数据分析，计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用方差