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银杏叶原料与产品中游离黄酮苷元含量相关性分析 　　摘要：以不同树龄、产地、采收期的银杏叶为原料制备银杏叶提取物，并采用高效液相色谱分别测定银杏叶及其产品中游离槲皮素、山奈酚、异鼠李素3种黄酮苷元的含量，确定银杏叶原料与产品中3种游离黄酮苷元的含量变化关系，为银杏叶提取物产品的质量控制提供翔实的参数，杜绝向银杏叶提取物中人为添加相关黄酮苷元，促进银杏产业的健康发展。 　　关键词：银杏叶；银杏叶提取物；黄酮苷元；高效液相色谱 　　中图分类号：R284.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2015）07-0344-03 　　银杏（Ginkgo biloba L.）为银杏科（Ginkoaceae）银杏属植物，别称白果树、公孙树、鸭脚通，是我国特有的珍贵植物。银杏叶提取物是以银杏树叶为原料，采用现代工艺加工而成的天然药物，具有清除人体自由基，降低过氧化脂质的产生，抑制血小板活化因子，提高红细胞活性，增强红细胞的变形能力，降低血液黏度，防止血栓形成等作用，能有效促进人体心、脑血管及外周微细血液循环，防治心脑血管疾病[1]。银杏叶提取物对眩晕、耳鸣、头痛等脑神经功能障碍及老年性痴呆症等也有良好的治疗作用。目前，银杏叶和银杏叶提取物作为原料药，已被广泛用于制作治疗心脑血管疾病的制剂，仅《中国药典》就收载了包括银杏叶在内的5个相关品种。《欧洲药典》规定了银杏叶和银杏叶提取物的标准；《美国药典》将银杏叶及其制剂作为食品补充剂收录。尽管国内外尚无统一标准，但各国对该类药品的质量控制手段基本一致，如《中国药典》（2010版）中银杏叶提取物质量标准对银杏黄酮苷的要求为：黄酮苷含量≥24%。测定方法是将银杏叶提取物水解后，采用HPLC法测定槲皮素、山奈酚、异鼠李素3种黄酮苷元的含量，再将其总含量×2.51转化为银杏黄酮苷的含量，同时要求槲皮素与山奈酚的峰面积比值在0.8～1.2之间；异鼠李素与槲皮素的峰面积比值大于0.15。植物中黄酮大部分以苷的形式存在，少部分以游离形式存在[2]，此检测方法未扣除产品中已有的游离黄酮苷元，因此测定的银杏黄酮苷含量高于实际结果，为不法商贩对银杏叶提取物产品掺假创造了机会。虽然《中国药典》（2010版）中的TLC鉴别法[1]可对银杏黄酮苷进行识别，但黄酮苷展开剂很难判断游离黄酮，且不能对银杏叶提取物中的游离黄酮苷元定量，致使不法厂家、商贩按比例向银杏叶提取物产品中添加槲皮素、山奈酚等黄酮类化合物，以提高产品中银杏黄酮苷的含量并达到《中国药典》（2010版）的质量要求。为杜绝掺假行为，有必要对银杏叶及其产品中3种游离黄酮苷元的含量进行相关性分析，并确定含量标准。关于银杏叶中黄酮类化合物的测定已有研究[3-5]，但银杏叶提取物、银杏叶及其产品中3种游离黄酮苷元含量变化的相关分析尚未见报道。 　　1 仪器与材料 　　高效液相色谱仪（日本岛津公司），包括LC-10ATvp型输液泵，SPD-10Avp型可变波长紫外检测器，CTO-10AS型柱温箱，N2000型色谱数据处理系统；TU-180PC型紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；RE52-98型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；KQ-500型超声器（昆山超声仪器有限公司）。四川银杏树叶采于四川省都江堰市，其工业生产用叶由四川省什邡市华康药物原料厂提供；山东银杏树叶（工业生产用叶，树龄10年以上）由四川省都江堰市芳华园林有限责任公司提供；江苏银杏树叶（工业生产用叶，树龄10年以上）由成都世熙生物技术有限公司提供。槲皮素、山奈酚、异鼠李素对照品均由中国药品生物制品检定所生产，纯度均为98%；甲醇（色谱纯）；磷酸（分析纯）；二次蒸馏水（自制）；提取用甲醇（分析纯）。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　在《中国药典》（2010版）[1]的色谱条件下，3种黄酮苷元的保留时间适中，主峰与相邻物质峰的分离度大于1.5，理论塔板数按槲皮素峰计算大于3 500，完全达到药典要求（图1）。 　　2.2 对照品溶液的制备 　　准确称取槲皮素4.5 mg、山奈酚3.1 mg、异鼠李素2.0 mg 置于25 mL容量瓶中，加适量甲醇使其溶解并定容至刻度，摇匀后即得对照品储备混合液（槲皮素0.176 4 mg/mL、山奈酚0.121 52 mg/mL、异李素0.078 4 mg/mL）。 　　2.3 银杏叶提取物的制备 　　银杏叶于60 ℃烘干，粉碎后过40目筛，取粉末100 g按《中国药典》（2010版）中的条件制备银杏叶提取物[1]。 　　2.4 银杏叶供试品溶液的制备 　　银杏叶于60 ℃烘干，粉碎后过40目筛，准确称取5 g粉末并置于圆底烧瓶中，用甲醇提取3次，每次加甲醇 50 mL，分别于60 ℃回流提取3、2、1 h，以转速