银杏叶对照提取物中7种黄酮醇苷类化合物定量研究.docVIP

银杏叶对照提取物中7种黄酮醇苷类化合物定量研究 　　[摘要]从银杏叶提取物中提取分离得到6种黄酮醇苷单体化合物，并对其进行标化，在4种分析条件下，用标定后的单体化合物，对2批银杏叶对照提取物中该6个化合物及芦丁进行标定。芦丁、山柰酚3O芸香糖苷、山柰酚3O鼠李糖2葡萄糖苷、槲皮素3O鼠李糖2O（6O对羟基反式桂皮酰）葡萄糖苷、山柰酚3O鼠李糖2O（6O对羟基反式桂皮酰）葡萄糖苷含量测定结果的RSD为1.1%～4.6%，槲皮素3O葡萄糖苷、异鼠李素3O芸香糖苷的测定结果RSD大于5%。结果表明，用银杏叶对照提取物替代相应的对照品，可用于同时测定银杏叶制品中芦丁、山柰酚3O芸香糖苷、山柰酚3O鼠李糖2葡萄糖苷、槲皮素3O鼠李糖2O（6O对羟基反式桂皮酰）葡萄糖苷、山柰酚3O鼠李糖2O（6O对羟基反式桂皮酰）葡萄糖苷5个黄酮醇苷成分的含量。因此使用对照提取物代替单体对照品测定银杏叶制品具有可行性。 　　[关键词]银杏叶对照提取物；标定；对照品替代法 　　从20世纪60年代起，随着对银杏叶药用价值和临床应用的深入研究，银杏叶制剂在国际市场上越来越受到瞩目，近年国际市场上，银杏叶提取物制剂总销售额达到每年20～25亿美元。黄酮类化合物为银杏叶中主要有效活性成分，成为银杏叶制剂质量控制的主要指标成分，但目前对于黄酮醇苷类成分原型[13]的控制探究较少，主要因为黄酮醇苷类化合物种类多，提取分离工作繁重，成本高；近年对照品替代法在中药质量控制中越来越得到人们的关注[410]。本研究在黄酮原型化合物指纹图谱研究[1112]的基础上，分离得到了6种黄酮醇苷单体化合物，对其进行了标化，利用标化后的单体化合物，对中国食品药品检定研究院发放的2批银杏叶对照提取物（供鉴别用）中的该6个化合物及芦丁进行了标定，使之成为可以用于定量分析的对照物质，为银杏叶制剂黄酮醇苷类原型化合物的定量分析，提供了物质基础。 　　1材料 　　Waters2689高效液相色谱仪；Waters2998高效液相色谱仪；Agilent1100高效液相色谱仪；色谱柱①YMCPackODSAQ色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；②InertsilODS3色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；③phenomenexGeminiC18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；④InertsilODS3色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）。 　　芦丁（批号100080200707，纯度90.5%），由中国食品药品检定研究院提供；槲皮素3O葡萄糖苷，山柰酚3O芸香糖苷，异鼠李素3O芸香糖苷，山柰酚3O鼠李糖2葡萄糖苷，槲皮素3O鼠李糖2O（6O对羟基反式桂皮酰）葡萄糖苷，山柰酚3O鼠李糖2O（6O对羟基反式桂皮酰）葡萄糖苷，本实验室制备，纯度分别为95.8%，98.7%，97.1%，97.4%，96.4%，94.3%。银杏叶对照提取物（批号110866200803，110866200202），由中国食品药品检定研究院提供。 　　乙腈为色谱纯，磷酸为优级纯，其他试剂均为分析纯；水为超纯水。 　　2方法与结果 　　2.1溶液的制备 　　2.1.1混合对照品溶液的制备精密称取芦丁、槲皮素3O葡萄糖苷、山柰酚3O芸香糖苷、异鼠李素3O芸香糖苷、山柰酚3O鼠李糖2葡萄糖苷、槲皮素3O鼠李糖2O（6O对羟基反式桂皮酰）葡萄糖苷、山柰酚3O鼠李糖2O（6O对羟基反式桂皮酰）葡萄糖苷对照品适量，加甲醇制成每1mL分别含97.03，12.12，45.95，53.25，43.52，92.70，83.13μg的混合溶液，即得。 　　2.1.2供试品溶液的制备精密称取对照提取物0.035g，精密加入甲醇10mL，超声处理10min使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。 　　2.2色谱条件 　　2.2.1流动相梯度条件①流动相乙腈（A）0.4%磷酸溶液（B）梯度洗脱：0～8min，16.5%A，8～17min，16.5%～20%A，17～20min，20%A，20～34min，20%～22%A，34～40min，22%A，40～60min，22%～33%A，60.01～70min，16.5%A；流速1mL?min-1；梯度条件②流动相乙腈（A）0.4%磷酸溶液（B）梯度洗脱：0～8min，16.3%A，8～17min，16.3%～18%A，17～20min，18%A，20～34min，18%～23%A，34～40min，23%A，40～60min，23%～33%A，60.01～70min，16.3%A；流速1mL?min-1。 　　2.2.2检测波长①梯度波长：0～24min，360nm，24～31min，344nm，31～70min，315nm；②梯度波长：0～24min，360