金铁锁糖基转移酶PtT1克隆与生物信息学分析.docVIP

金铁锁糖基转移酶PtT1克隆与生物信息学分析 　　【摘要】目的：克隆金铁锁糖基转移酶（PtT1）全长基因，并进行生物信息学分析。方法：根据转录组数据，克隆金铁锁PtT1全长cDNA，命名为PtT1，并通过生物信息学软件对该基因进行蛋白结构预测和构建进化树等分析。结果：克隆得到PtT1基因，其cDNA全长1529bp，ORF长1377bp，编码458个氨基酸，相对分子质量为5125KDa，等电点580，定位于线粒体，与同科植物香石竹糖基转移酶基因DcT227具有很高的同源性。结论：成功克隆、分析了金铁锁PtT1基因，为金铁锁该基因的后续功能鉴定提供了基础。 　　【关键词】金铁锁；糖基转移酶；生物信息学 　　【中图分类号】R9141【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）04-0023-04 　　Cloning of PtT1 genes of Psammosilene tunicoides and BioinformaticsLI YuanLI GuodongZHANG Aili*QIAN Zigang* 　　Engineering Research Center for Reproducing Fine Varieties of Chinese Medicinal Plants， Yunnan University 　　of Traditional， Chinese Medicine， Kunming 650500， ChinaAbstract：Subject To clone the glycosyltransferase gene（PtT1） in Psammosilene tunicoides， and to analyze the bioinformation of PtT1. Methods cDNA was reversely transcriped according to the Transcriptome Sequencing. The protein characteristics was analyzed and the phylogenetic tree of PtT1 was constructed using the bioinformatics. ResultsThe 1529bp sequence in P. tunicoides was obtained， which has a 1377bp ORF， encoding 458 amino acids. The protein molecular weight was5125KD， with the isoelectric point of 580. The protein was located at mitochondria. The PtT1 in P.tunicoides was most similar with Dianthus caryophyllus DcT227 by NCBI blast. Conclusions The PtT1 in P. tunicoides was successfully cloned and analyzed， which provides the foundation for this gene function characterization. 　　Keywords： Psammosilene tunicoides； Glycosyltransferase； Bioinformation 　　植物中化合物的糖基化是一种很普遍的生理现象，是植物细胞维持代谢平衡的主要机制之一[1]。糖基转移酶则是负责催化分子糖基化修饰反应的酶，其可将活性糖基从尿嘧啶核苷二磷酸-葡萄糖（UDP-glucose）转移至次级代谢物及植物内外源毒性物质等一系列植物小分子化合物受体中[2]。糖基化经常是次生代谢产物主要的后修饰方式，往往修饰合成途径中的最终一步或几步。植物三萜皂苷类次生代谢产物，往往都具有较高的药理活性价值。其合成途径可前体形成，骨架构建及后修饰等三个过程[3]。次生代谢产物结构的基本骨架形成之后，经过细胞色素P450 酶和糖基转移酶等一系列关键酶基因的后修饰，最终形成众多种类繁多的三萜皂苷[4]。 　　金铁锁来源于石竹科金铁锁属植物金铁锁Psammosilene tunicoides W C Wu et C Y Wu的干燥根[5]。主要分布在云南、贵州、西藏等省，为云南的道地药材[6]，是云南白药等中成药的重要主要组成药之一。其活性成分为齐墩果烷型的三萜总皂苷[7-8]，具有显著镇痛、抗炎等的药理活性[9-10]。目前，参与金铁锁三萜皂苷合成途径前体形成，骨架构