微生物原生质体融合育种技术及其应用-生物通.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，３０（１）：９３９７ 微生物原生质体融合育种技术及其应用 １ ２，３ １ ２ 毛　雨 　王　丹 　黄占斌 　邢建民 （１中国矿业大学（北京）化学与环境工程学院　北京　１０００８３） （２中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室　北京　１００１９０　３中国科学院研究生院　北京　１０００４９） 摘要　工业微生物菌种选育在发酵工业中占有重要地位。微生物原生质体融合（ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｆｕｓｉｏｎ）技术具有重组频率高、受结合型或致育型限制小以及遗传物质传递完整等优点， 是微生物育种最常用的方法之一。结合相关研究进展，分析了原生质体融合技术的组成，包括制 备、再生、融合的影响因素以及融合子的筛选方法，重点评述了原生质体融合技术应用在微生物 育种中的最新进展，以及微生物原生质体融合技术的发展前景。 关键词　微生物　原生质体融合　遗传育种　基因组重组 中图分类号　Ｑ９３３ 　　微生物菌种是发酵工业中的一个关键因素，它决 及其遗传标记选择，双亲本原生质体制备和再生，亲本 定了发酵过程的成败及某一发酵产品是否具有工业化 原生质体诱导融合，融合重组体筛选，遗传特性分析和 价值。自然界中的原始菌株大多不具有很高的工业化 ［３］ 测定 。 价值，因此需要对菌株进行选育和改良，以提高产品的 １．１　原生质体的制备和再生 质量，降低成本。原生质体融合技术是起源于２０世纪 　　原生质体的制备首先要去除细胞壁，当前去壁的 ６０年代的一项重要的菌种改良技术，是将亲株细胞分 方法主要有机械法、非酶法和酶法，现在使用较多的为 别去除细胞壁后进行融合，经基因组间的交换重组，获 酶法。在放线菌和细菌中，主要采用溶菌酶，酵母菌和 ［１］ 得融合子的过程 。与其他育种技术相比，原生质体 霉菌一般用蜗牛酶、消解酶或纤维素酶等。影响原生 融合技术具有重组频率高、受结合型或致育型限制小 质体制备和再生的因素很多：在菌龄上，为了使细胞易 以及遗传物质传递完整且不需要完全了解作用机制等 于原生质体化，一般选择对数生长期或生长中期的菌 优点，因而被国内外微生物育种学者广泛应用。 体，也有的采用生长后期的菌。酶浓度以及作用时间 ［２］ 　　１９７４年，匈牙利的 Ｆｅｒｅｎｃｚｙ 成功将 白地霉 也会影响原生质体的制备和再生率，一般来说酶浓度 （Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍｃａｎｄｉｄｕｍ）营养缺陷型突变株的原生质体 越高，作用时间越长，原生质体制备率就越高，但酶解 进行融合，使原生质体融合技术首次应用于微生物中。 时间过长又会影响再生率。对于不同的菌体，优化其 接下来的几十年，该技术的基本实验方法逐步完善，现 最适酶浓度和作用时间非常必要。本实验室在琥珀酸 已作为一项十分有用的技术广泛应用于工业微生物菌 放线杆菌（ Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｃｃｉｎｏｇｅｎ