阿司匹林预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤神经保护作用.docVIP

阿司匹林预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤神经保护作用 　　陈立英　廖仁吴　梁容仙　王　敬 　　摘要：目的探讨阿司匹林预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组、阿司匹林预处理组。各组采用大脑中动脉线栓法制备缺血再灌注损伤实验动物模型。比较各组神经功能缺失评分、脑梗死体积、血清神经元烯醇化酶(NSE)含量及脑组织白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子(TNF-cz)含量。结果阿司匹林预处理组可使神经功能缺损减轻、脑梗死体积缩小、血清NSE含量降低，均较脑缺血再灌注组明显。同时脑组织IL-1β和TNF-α含量亦较脑缺血再灌注组降低。结论阿司匹林预处理可诱导脑缺血耐受作用，其机制可能与下调脑组织再灌注损伤时IL-1β和TNF-α的表达有关。 　　关键词：阿司匹林；预处理；脑缺血；再灌注损伤；白细胞介素-1β；肿瘤坏死因子-α 　　中图分类号：R743.3 R255.3　文献标识码：A　文章编号：1672－1349(2007)08－D710－02 　　 　　近年来发现预先给予一些药物可诱导脑缺血耐受(ischemictolerance，IT)，从而减轻缺血再灌注所致的脑损伤，此现象称为药物预处理。阿司匹林(aspirin／acetylsalicylic acid，ASA)具有抗炎、抗血小板聚集等作用，是防治缺血性脑血管疾病的重要药物之一。近年来研究发现，阿司匹林除有抗血栓形成作用外，还有直接的脑保护作用，其保护作用是否与IT有关，报道尚少见。现利用缺血再灌注模型，观察ASA对大鼠缺血再灌注损伤保护作用的影响。结果如下。 　　 　　1　材料与方法 　 　　1．1 实验动物选用健康雄性Sprague-Dawley大鼠36只，由河北医科大学实验动物中心提供，体重250g－320g，随机分为3组，每组12只。假手术组：等量生理盐水灌胃；脑缺血再灌注组：等量生理盐水灌胃，2h大脑中动脉阻塞(MCAO)，再灌注22h后处死；阿司匹林预处理组：ASA(由山东新华制药股份有限公司提供，批号：0506338)60 rag／(kg?d)溶于2 mL生理盐水中，灌胃，3d后造成2h　MCAO，再灌注22h后处死。 　　 　　1．2 缺血再灌注模型制作采用Longa等的大脑中动脉线栓法并加以改进。以10％水合氯醛(0.35 mL／100.g)腹腔注射麻醉大鼠后，分离出左颈外动脉、颈内动脉及分叉处，结扎并切断左颈外动脉及其分支，将左颈外动脉残端下拉与颈内动脉呈一条直线，在左颈外动脉残端剪一小口，插入一根顶端粘有石蜡的尼龙丝线(直径0.20ram)向上深入至颈总动脉分叉以上(19－21)mm阻断大脑中动脉造成大脑中动脉缺血，2h后将尼龙线抽出形成再灌注，22h后行神经功能缺损评分后断头处死。模型成功的标志是大脑中动脉缺血后同侧即刻出现Honer征，动物清醒后爬行时向右转圈，严重时向右跌倒，提尾时右前肢内收屈曲且一直存活到再灌注22h。假手术组除不插入线栓外，其他操作步骤同上。 　　 　　1．3 神经功能缺失评分按Longa等的5级评分法评分：0级，无功能障碍；l级，不能伸展右侧前肢；2级，向右侧旋转；3级，向右侧倾倒；4级，无自主活动伴意识丧失。 　　 　　1．4 血清神经元烯醇化酶(NSE)的测定神经功能缺失评分-完毕后，取心脏血2mL，离心后取血清，置－20℃冰箱内保存，整批待测，按照NSE－ELISA试剂盒说明操作测定，单位为ng／mL。 　　 　　1．5 脑梗死体积测定取血完毕后，每组各随机选取6只动物，以10％水合氯醛深麻醉后处死，取左侧大脑半球，冠状面均匀切成2mm厚脑片，迅速放入2％的TTC(2，3，5～三苯基氯化四氮唑)溶液(37℃)中染色30min，然后用10％甲醛缓冲液固定。24h后照相，测量每个层面梗死灶面积，将各脑片梗死面积之和乘以厚度(2mm)为总的梗死体积。 　　 　　1．6 脑组织白细胞介素－1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量测定每组另外6只动物用10％的水合氯醛深麻醉后处死，迅速取出鼠脑，剥离左侧皮质，称重后按400 mg／mL加生理盐水制脑组织匀浆，匀浆液3 000r／min低温离心15min，取上-清液置20℃冰箱内待测。后采用FT－DF7－晶体闪烁计数仪(北京核仪器厂生产)，测定脑组织IL-1β和TNF－α的含量。试剂盒均由解放军总医院科技开发中心放免所提供。 　　 　　1．7 统计学处理数据用均数±标准差（x±s)表示，用SPSS10.0统计软件处理，多组比较进行方差分析及两两比较q检验，两组间比较采用t或t’检验。 　　 　　2　结果 　　 　　2．1 各组神经功能缺失评分、血清NSE含量