阴阳离子交换色谱电感耦合等离子体质谱法分析鱼和贝类海产品砷形态.docVIP

阴阳离子交换色谱电感耦合等离子体质谱法分析鱼和贝类海产品砷形态 　　摘 要 采用阴（Hamilton PRP-X100柱）阳（Dionex Ionpac CS-10柱）离子交换色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术，分别以pH 10.3的20 mmol/L NH4HCO3和pH 2.0的5 mmol/L吡啶溶液为流动相，建立了三价砷As?B、五价砷As?D、一甲基砷酸MMA、二甲基砷酸DMA、砷甜菜碱AsB、砷糖PO4、砷糖OH、砷糖SO3、砷糖SO4砷形态的分析方法。采用微波消解法和超声溶剂提取法对我国不同海域9种鱼和贝类海产品进行前处理，对砷含量及其化学形态进行分析。实验表明，鱼和贝海产品主要砷形态为砷甜菜碱AsB，其含量占可提取砷的42.8%～99.4%，大多数贝类样品含有砷糖PO4、砷糖OH，其含量分别占可提取砷的32.5%～57.1%和1.4%～3.3%，少数样品含有DMA，其含量分别占可提取砷的5.7%～25.0%, 所有样品无机砷的浓度均低于可提取砷的2.0%。在鱼和贝类海产品中，含砷化合物主要是毒性较低的有机砷，不会对人的健康带来危害。 　　关键词 高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱； 砷； 形态分析； 鱼和贝类海产品 　　 　　1 引 言 　　海洋生物中砷化物含量较高，是人体摄入砷的重要来源[1]。研究表明，砷的毒性与其存在的形态密切相关。以砷化物的半致死剂量LD50计，其毒性依次为H3As＞As?B ＞As?D ＞一甲基砷酸MMA＞二甲基砷酸DMA＞三甲基砷氧化物TMAO＞砷糖＞砷胆碱（AsC）＞砷甜菜碱（AsB），可见无机砷的毒性最大，而有机砷的毒性较小，而AsC和AsB被认为是无毒的[2]。因而传统的元素总浓度的测定已经不能满足评估砷的暴露或摄入对人的健康危害的影响，砷的毒性研究应该从砷的形态入手，区分海产品无机砷和有机砷化物，特别在砷的循环与转化过程中起重要作用的砷糖[3]，以及无毒的砷胆碱和砷甜菜碱对于评价海产品安全性非常重要。 　　砷的形态分析主要采用液相色谱分离与电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）[2]、电感耦合等离子体发射光谱（ICP-AES）、原子荧光光谱（AFS）[4]、原子吸收光谱（AAS）等联用技术[5]。ICP-MS具有灵敏度高、检出限低等优点，已成为砷形态分析中最具前景的联用方法之一[6]。Larsen等[7]采用阴阳离子交换色谱成功分离8种不同形态砷的化合物，但不能分离4种砷糖； Madesn等[8]采用阴离子交换色谱分离4种形态砷的标准化合物和Fucus抽取物，并采用LC-ESMS（电喷雾质谱）确定四种砷糖结构，但As?B与一种砷糖保留时间相同。本实验采用阴离子交换色谱（Hamilton PRP-X100柱）和阳离子交换色谱（Dionex Ionpac CS-10柱）与ICP-MS联用技术，建立了9种不同形态砷的化合物的分析方法，对我国不同海域9种鱼（黄鱼、带鱼、三文鱼、鳕鱼）和贝（螃蟹、虾、牡蛎、蛏子、蚌）海产品中砷含量及其化学形态进行分析检测。在所有分析样品萃取物中AsB为砷的主要形态，无机砷的浓度低于总砷的2%。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　Elan 6000 电感耦合等离子体质谱仪（ICP-MS）（PE 公司）； Alltech Model 526 泵（Deerfield，1L， 美国），Model 9010金属阀，50μL进样管（Rheodyne, Cotata， CA，美国）；Ionpac CS10 阳离子交换柱（美国Dionex公司）, PRP-X100阴离子交换柱（美国Hamilton公司）；XYJ80-1型离心机（上海精密仪器仪表有限公司），MDS-2002A微波消解仪（上海新仪微波化学科技有限公司）。 　　吡啶（上海试剂厂）; NH4HCO3（北京试剂厂）; 甲醇（天津四有生物试剂厂）; HNO3（北京试剂厂）; Na2HAsO4#8226;7H2O储备液（Sigma, St. Louis，MO，USA），一甲基砷酸（MMA）,二甲基砷酸（DMA）（Commission of the European Communities, Standard, Measurement and Testing Programme）； Kelp粉末（Brirkbeck College, University，UK）; 砷糖PO4和砷糖OH（作者从天然物质中分离），鱼和贝样品（超市购买），所用试剂均为分析纯。水为18 MΩ超纯水。不同形态的砷的化学结构见文献[8]。 　　2.2 实验方法 　　2.2.1 样品的萃取与硝化 取适量鱼和贝类肌肉组织用粉碎机粉碎，称取5.000 g于聚四氟乙烯管中，加入10 mL甲醇-水（1∶1，V/V），超