食源性致病菌O157H7生物检测研究.docVIP

食源性致病菌O157H7生物检测研究 　　摘要：根据致病性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的致病基因ｒｆｂＥ设计特异性引物扩增出致病性Ｏ１５７：Ｈ７特异性序列，然后分别用常规的琼脂糖电泳技术和Ａｇｉｌｅｎｔ ２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ对ＰＣＲ产物进行检测，并比较两种检测方法的灵敏度、准确度和重复性。结果表明，Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ的灵敏性较琼脂糖凝胶电泳法高；其能准确地确定片段的大小（误差率小于５％），可提供ＰＣＲ目的片段的质量浓度和摩尔浓度。Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ芯片分析系统结合ＰＣＲ方法可对食源性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７进行特异、准确、稳定、灵敏的检测和鉴定，具有重要的推广价值。 　　关键词：大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７；聚合酶链反应；安捷伦２１００生物分析仪；琼脂糖凝胶电泳 　　中图分类号：ＴＳ２０７．４；Ｓ８５２．６１＋２ 文献标识码：??? 文章编号：0439－８114（２０11）01－0177-03 　　 　　Detection of Foodborne Escherichia coli O157:H7 Using Agilent 2100 Bioanalyzer 　　 　　ＦＥＮＧ Ｊｉａｎ１，ＢＡＩ Ｙａｎ－ｈｏｎｇ１，ＷＡＮＧ Ｙｕｎ－ｌｏｎｇ２，ＪＩＮＧ Ｊｉａｎ－ｚｈｏｕ１ 　　（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｚｈｅｎｇzｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｇｈｔ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ， Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５０００２， Ｃｈｉｎａ； 　　２．Ｈｅｎａｎ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ， Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００２， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｆｏｏｄｂｏｒｎｅ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｏ１５７：Ｈ７ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ through ｂｏｔｈ Ａｇｉｌｅｎｔ ２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ ａｎｄ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｗｈｅｎ the ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｉｍ ｇｅｎｅ ｒｆｂＥ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ＰＣＲ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ． Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ， ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ， ａｃｃｕｒａｃｙ， ａｎｄ ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ． Ｔｈｅ Bｉｏａｎａｌｙｚｅｒ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ａｓ １０ ｔｉｍｅｓ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｓ ｔｈｅ ａｇｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ， ａｎｄ ｉｔ ｃｏｕｌｄ provide ｔｈｅ ａｃｃｕｒａｔｅ ｓｉｚｅ， ｍａｓｓ ａｎｄ ｍｏｌａｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔ． Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ Ａｇｉｌｅｎｔ ２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ ｍｅｔｈｏｄ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｆｏｏｄｂｏｒｎｅ Ｅ. ｃｏｌｉ Ｏ１５７：Ｈ７． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｏ１５７：Ｈ７； ＰＣＲ； Ａｇｉｌｅｎｔ ２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ； ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ 　　 　　大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７是肠出血性大肠杆菌（ＥＨＥＣ）的一个主要血清型，牛、羊、猪等家畜是其主要宿主［１］，人类由于食用被大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７污染的食品或水源而致病。自１９８３年美国Ｒｉｌｅｙ等［２］首次报道大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７可以引起出血性肠炎以来，相继在英国、加拿大、日本等国出现暴发性流行病例。１９８７年我国首次由权太叔等从出血性结肠炎患者粪便中分离到大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７，此后福建、浙江、广东、河北、宁夏等十几个省区陆续分离出该菌［３］。有研究表明，人感染１０个活菌即可致病，导致患者出现剧烈腹痛，引起出血性结肠炎甚至溶血性尿毒综合征［4，５］。 　　获得快速、敏感、特异的检测方法对于临床诊断和疫情控制是非常必要的。目前，常见的大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７检验方法主要有常规生化分离鉴定法、免疫磁珠法、酶联免疫吸附法、乳胶凝集试验法、基因探针法、聚合酶链式反应法、微生物鉴定仪法等［６－８］。常规生化方法操作复杂、耗时较长；免疫学方法可对大量样品进行筛选，但容易出现假阳性；而聚合酶链式反应法在病原菌的分子检测中已成为一种常用方法，其中敏感性、特异性和可靠性是衡量ＰＣＲ扩增效率的３个重要指标。本试验使