高产多肽发酵豆粕制备工艺研究.docVIP

高产多肽发酵豆粕制备工艺研究 　　摘要 通过菌种、接种量选择和发酵条件优化，研究了高产多肽发酵豆粕的制备工艺，得出一套最佳发酵工艺参数。各菌种的最佳接种量为：枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）X2、X3、X4均接种0.6%，啤酒酵母（Saccharomyces crevisiae）Y和乳酸杆菌（Lactobacillus）Z均接种1%；最佳发酵基本条件为：豆粕粒度40目、发酵起始温度40℃、料水比1∶1、初始pH值为7、糖蜜添加1%、物料厚3.5cm、发酵时间48h。 　　关键词豆粕；发酵；制备工艺；多肽 　　中图分类号 TS229文献标识码A文章编号 1007-5739（2008）24-0235-03 　　 　　随着畜牧业的迅速发展，蛋白质需求量越来越大，但由于食品安全性问题，鱼粉等动物性蛋白质源的使用逐渐受到限制，因此，找到优质植物性蛋白质源已成为全世界科技研发的重点。豆粕是我国乃至全世界应用最为广泛的植物性饲料蛋白质原料，但随着科技的进步和研究的深入，人们发现80%左右的大豆蛋白质相对分子质量都在100kDa以上，且大多数分子内部呈反平行β-helix非有序结构，分子高度压缩、折叠，使得豆粕蛋白质的消化性和生物学功能远不及鱼粉等动物性蛋白质饲料。此外，豆粕中存在多种抗营养因子，对动物有毒害作用，严重影响了豆粕在动物生产上的应用价值等[1，2]。目前，大量研究表明，微生物发酵可以消除豆粕中的各种抗营养因子[3，4]，大豆蛋白质多肽也具有优良的营养生理特性[5，6]。因此，本研究拟采用多菌种混合固体发酵技术，制备高产多肽发酵豆粕，为解决我国畜牧业发展中优质蛋白质资源紧缺的问题提供一定的理论依据和技术支持。 　　1 材料与方法 　　1.1发酵原料 　　试验所用的去皮豆粕购于东莞中谷油脂有限公司。 　　1.2菌种 　　试验初始选择的菌种有：4株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）（X1、X2、X3、X4，其中X4为航空诱变菌株）、啤酒酵母（Saccharomyces crevisiae）（Y）和乳酸杆菌（Lactobacillus）（Z），均为广东省农科院农业生物技术研究所保藏菌种。 　　1.3 斜面及液体种子培养基 　　枯草芽孢杆菌：LB培养基；啤酒酵母：麦芽汁培养基；乳酸杆菌：MC培养基。 　　1.4 二级菌种培养方法 　　枯草芽孢杆菌和酵母菌：???别从斜面培养基上挑取一环菌苔接入100mL各菌种的液体种子培养基中，在250mL三角瓶中，35℃、170rpm摇动培养24h（一级菌种）；分别取1mL一级菌种接入100mL各菌种的液体种子培养基中，在250mL三角瓶中，35℃、170rpm摇动培养20h，得二级菌种（发酵用菌种）。 　　乳酸杆菌：从斜面培养基上挑取一环菌苔接入100mL液体种子培养基中，在250mL三角瓶中于30~35℃下静止培养40~48h（一级菌种）；再取1mL一级菌种接入100mL液体种子培养基中，在250mL三角瓶中于30~35℃下静止培养48h，得二级菌种（发酵用菌种）。 　　1.5 发酵工艺 　　斜面菌种→活化→一级培养→二级培养； 　　豆粕粉碎→配料计量→灭菌处理→底物接种→混匀→发酵→60℃烘干制样。 　　1.6 试验设计 　　1.6.1菌种选择。枯草芽孢杆菌X1、X2、X3、X4随机区组后与啤酒酵母Y和乳酸杆菌Z混合进行发酵，分别在24h、48h、72h、96h进行取样，测定发酵产物水溶性蛋白质和中小分子蛋白质含量，通过观察各组合的动态变化确定最佳菌株组合。试验共设15个处理，每处理设3次重复，具体见表1。 　　 　　1.6.2发酵参数优化。采用4水平5因素正交试验，确定X2、X3、X4、Y、Z 5株株菌的接种量和豆粕粒度、发酵温度、料水比、初始pH值、糖蜜添加量5个条件的最佳值；分别在500mL广口瓶中装30g、50g、100g、200g豆粕进行发酵，考察不同装料量对发酵结果的影响。每处理设3次重复。 　　1.7 测定指标及方法 　　1.7.1水溶性蛋白测定。参照GB/T 5511-1985补充文件。 　　1.7.2中小分子蛋白测定。根据隆丁分区法，蛋白质区分为A、B、C 3区。B区和C区分别为中、小分子量蛋白质。李小东等[7]研究结果显示，隆丁区分法测得的大豆蛋白质肽水解物中，B、C区蛋白质分子量≤2 300Da，是肽和游离氨基酸的混合物。称取粉碎试样2g于250mL磨口带塞锥形瓶中，加水80mL，摇晃使均匀分散，在25~30℃下振荡2h，取出，将混合液转移至100mL容量瓶中，加水至约90mL，加入2mL比重为1.4g/L的硫酸溶液配兑摇匀，在20℃水浴中保温15min，加入16%单宁溶液5mL，摇匀，加水