6.细菌学感染的检测方法与防治原则课件.ppt

* * 细 菌 感 染 的 检 测 方 法 与 防 治 原 则 第一节 细菌感染的实验室诊断 标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。 根据疾病的种类与采取不同标本。 应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应加入拮抗剂。 标本采集后尽快送检并采取适当的保存方式。 一、标本采集与送检原则 （一）供检出细菌及成分（抗原、核酸）的标本： （二）供检测特异性抗体的标本：应在发病初期和恢复期各取 1 份血清。 二、细菌及成分的检测 标本 直接涂片染色镜检 初步诊断 分离培养 生化试验 血清学鉴定 毒力试验 药物敏感试验 明确诊断 细菌抗原的检测 细菌核酸的检测 （一）细菌形态与结构检查 1. 显微镜放大法 2. 染色法 普通光学显微镜（light microscope） 电子显微镜（electron microscope） 暗视野显微镜（darkfield microscope） 相差显微镜（phase contrast microscope） 荧光显微镜（fluorescence microscope） 激光共聚焦显微镜（cofocal microscope） 1.普通光学显微镜 自然光为光源； 最大分辨率为0.2μm； 可放大1000倍。 2.电子显微镜： 以电子流代替光源； 分辨率1nm ； 放大倍数可达10万～100万倍。 电镜标本制作复杂，且必须在真空干燥状态下观察，因此不能观察活的微生物。 肉眼：0.1－0.2 mm 光镜：0.1－0.2 μm 电镜：0.1－0.2 nm 最小分辨率 流感病毒 HBV HIV 3.暗视野显微镜 常用于活的微生物的动力检测 4.相差显微镜 观察未染色标本的显微镜，应用于活细胞的形态及某些内部结构的观察。 细胞 酵母菌 链球菌 5.荧光显微镜 以紫外光或蓝紫光作光源，因其波长比自然光短，故分辨率比普通光学显微镜要高。 6. 激光共聚焦扫描显微镜 是在荧光显微镜成像基础上加装了激光扫描装置，利用计算机进行图像处理，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像，也可以用于细胞内生化成分的定量分析、光密度统计等。 蓝色为细胞核，绿色为微管。 简单染色法：只用一种染料染色，只能观察细菌的形态，但不能鉴别细菌。 复合染色法（鉴别染色法）：采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便能够鉴别细菌和观察细菌的特殊构造，如革兰染色法、抗酸染色法、特殊染色法。 染色方法的种类 结晶紫 碘液 95%乙醇 稀释复红 （初染） （媒染） （脱色） （复染） 革兰阳性菌 革兰阴性菌 （菌体为紫色 ） （菌体为红色） 革兰染色法 革兰阳性菌 革兰阴性菌 （菌体为紫色 ） （ 菌体为红色） （G+菌） （ G-菌） 麻 风 杆 菌（抗酸染色法） 鞭毛染色法 （二）细菌分离培养和鉴定 分离培养是微生物学诊断的金标准，是最可靠的传统诊断技术。 普通琼脂平板 标本接种 ? 血琼脂平板 菌落 选择培养基平板 （1）观察菌落特征、溶血环特征等 （2）生化反应：如肠道杆菌的乳糖发酵试验 （3）血清学鉴定：用已知的抗体检查未知抗原 （4）毒力鉴定：内、外毒素检测或动物试验 （5）药敏试验 涂片、染色、镜检。 分离培养与鉴定： 纯种 A B A.白色葡萄球菌在普通琼脂平板上的菌落特征 B.金黄色葡萄球菌在普通琼脂平板上的菌落特征 菌落特征观察 A.表皮葡萄球菌在血琼脂平板上的菌落特征 B.金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的菌落特征 A B 菌落特征观察 肠道杆菌生化反应 大肠埃希菌