基因诊断概论完整课件.ppt

通过检测癌基因和抑癌基因诊断肿瘤（续） 2 .P53基因与肿瘤：p53基因是最常被失活的抑癌基 因，失活的分子机制主要是基因突变，也有因为基 因表达异常而使p53失活，约50%以上的恶性肿瘤有 p53基因突变。 突变类型：130?290密码子间常发生点突变，也有少量的插入或缺失突变。 基因检测方法：① PCR-SSCP:可检出有无突变 ② PCR-RFLP:通过内切酶位点的消 失或增加检测p53的基因突变。 三.通过检测肿瘤相关病毒诊断肿瘤 已经发现多种病毒与肿瘤的发生有关，它们有DNA病毒，也有RNA病毒,其中逆转录病毒(retro-virus)对动物细胞的致瘤作用已得到公认.还发现一些与人肿瘤发生有关的病毒如: Burkitt 淋巴瘤 人类乳头瘤病毒(HPV) 宫颈癌 通过检测这些病毒的基因就可以帮助诊断相应的肿瘤. EB病毒 四.通过检测肿瘤标记物基因或mRNA诊断肿瘤 肿瘤标志物（tumor marker)是由肿瘤组织细胞产生的，与肿瘤形成和发展相关的物质，包括：肿瘤抗原，激素，酶和同工酶。仅存在肿瘤细胞中。 类型： ①基因标志：是指基因本身突变和异常表达，能反映癌前启动阶段的变 ②基因表型标志：基因产物表达和调控异常，表现为所编码的表达产物合成紊乱，产生胚胎性抗原，一般出现较晚。 基因诊断方法： ① 基因变异导致肿瘤标记物的产生或含量改变，可选择：PCR-RFLP,PCR-ASO,PCR-测序，PCR-SSCP等技术。 ②导致肿瘤标记物产生或含量改变分子机制不清楚，可用RT-PCR技术检测肿瘤标记物mRNA的存在或含量的改变。如：端粒活性酶活性被用来作为肿瘤标记物，在肿瘤细胞中该酶的活性增高。 基因诊断存在的问题与发展前景 一.基因诊断技术应用存在的问题 1.理论问题 目前找到的致病基因不多,由多基因及基因 与环境互作所引发多种疾病的分子机制还不 清楚 2.技术问题 设备条件;操做人员;污染造成的假阳性. 3.伦理问题 二.发展前景 * 基因诊断的策略 从基因产物入手 从基因定位入手 从比较正常和异常基因的差异入手 ★ 诊断的时机 症状前诊断 产前诊断 着床前诊断 DNA诊断 RNA诊断 FISH诊断 血红蛋白的构成 正常成年人血红蛋白-HbA（a2b2） 血红蛋白病 血红蛋白病是由于珠蛋白基因异常导致珠蛋白肽链结构异常或合成异常所引起的遗传性血液病。 结构异常： 异常血红蛋白 （镰状细胞贫血） 合成异常： a-地中海贫血 b-地中海贫血 镰状细胞贫血由β链基因点突变引起该病的主要原因是因为珠蛋白的β基因发生单一碱基突变,正常β基因的第6位密码子为GAG,编码谷氨酸,突变后为GTG,编码缬氨酸,使成为HbS. ★ Mst II CCTG AGG CCTG TGG 突变型 野生型 1.15kb 0.2kb 1.35kb 1.35 kb 1.15 kb βΑ/βΑ βΑ/βS βS/βS 限制酶切片段电泳后，经Southern Blot检测 已知突变Gene部位和性质，合成寡核苷酸探针，32P标记，进行Southern Blot 杂交/斑点杂交。 Normal βΑGene Probe Mutation βS Gene Probe ASO探针诊断 正常探针 突变探针 βΑ/βΑ βΑ/βS βS/βS 斑点杂交结果 α地中海贫血 ζ ψζ ψα2 ψα1 α2 α1 θ1 表型 基因型 正常人 αα/αα 静止型α地中海贫血 α－/αα 轻型α地中海贫血 －－/αα HbH病 α－/－－ Hb Bart综合征 －－/－－ ★ α地贫的Gene诊断 α基因不同程度的缺失引起不同类型的α地贫，α基因缺失1～4个。正常Gene组用BamHI切割，可得到14kb的片段，而缺失一个α Gene时可得到10kb片段。 BamHI BamHI α2 α1 α2 10 kb 14 kb probe 14kb 10kb aa/aa aa/a- aa/- - a-/- - - -/- - 正常 缺1 缺2 缺3 缺4 b地中海贫血 LCR ε Gγ Aγ ψβ1 δ β IVS-I IVS-II 在b珠蛋白基因第2内含子第654位核苷酸C→T突变（IVS-II-654 C→T ，简称b654