香丹关节腔注射治疗膝骨性关节炎关节软骨I II型损伤实验研究.docVIP

香丹关节腔注射治疗膝骨性关节炎关节软骨I II型损伤实验研究 　　【摘要】 目的：通过香丹注射液关节腔注射，治疗膝骨性关节炎关节软骨I、 II型损伤的实验研究，了解香丹注射液对关节软骨I、 II型损伤的治疗，探讨其作用机制。方法：通过手术采用Hulth 法建立模型，分设香丹组和对照组，分别予以香丹注射液、生理盐水注射。从对关节软骨形态进行大体观察，对比，观察关节软骨损伤及修复。测量膝关节外周径，观察关节肿胀程度。根据改良Mankin法，对比观察药物对关节软骨的修复作用。检测关节液内NO含量并进行对比，观察用药后关节内炎性物质的变化等方面进行研究。结果：8周时，香丹组关节肿胀程度明显减轻，关节软骨色泽及完整性香丹组尚无明显优势。10周时香丹组和对照组已有明显差别。14周时香丹组优于对照组。结论：香丹注射液能明显减少关节积液，消除关节滑膜炎症，缓解疼痛。尤其对膝骨关节炎早期，能对软骨修复再生起一定作用，延缓，疾病的发展进程。 　　【关键词】膝骨性关节炎;关节软骨; II型损伤;实验动物;香丹注射液 　　【中图分类号】R579【文献标识码】A【文章编号】1005-0515(2011)04-0060-02 　　香丹注射液是心脑血管系统用药，具有良好的改善循环血量的作用，已是临床常用药物，但至今还没有人将它用于关节腔注射以治疗膝骨性关节炎的报导。本研究从动物实验角度出发，从大体上观察关节软骨的形态、色泽，关节肿胀的测量、病理组织学观察，关节液中NO含量等方面，初探中药香丹注射液对关节软骨I、 II型损伤的影响及作用机理，为扩大香丹注射液适应症的范围及给药途径提供理论基础。弥补了口服给药的不足，延缓了关节的退变,促进骨性关节炎病人早期康复，恢复正常的工作与生活，提高生活质量，具有较大的社会效益和经济效益。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物：健康家兔，雌性40只，2.0～2.5kg ，平均2.3kg,6～8月龄，造模前统一饲养1周。 　　黑龙江中医药大学动物实验中心提供。 　　1.2实验药物香丹注射液每支10ml , 生产厂家：正大青春宝药业有限公司。注射用水每支10ml，购自黑龙江中医药大学附属第二医院药局。 　　1.3 实验方法:采用Hulth 法建立模型。以 1.25%硫喷妥钠2ml/kg耳缘静脉给药，同时予5mg 安定注射液加倍稀释后肌注。随机选取左或右膝施行手术，作髌内侧纵斜行切口约1cm , 切断内侧副韧带，切除内侧半月板，切断前后交叉韧带，术中按无菌技术操作并注意保护关节软骨面不受损伤。术后不固定伤肢，术后给予肌注庆大霉素8万单位抗炎治疗三天，分笼饲养。每天驱赶动物2次，每次30分钟，共4周。 　　1.4 分组及给药方法:将模型兔随机分二组，在造模后4周开始给药。用药组膝关节腔每5日注射香丹注射液，连续给药16次，对照组关节腔内注射生理盐水。关节腔内注射剂量计算（现无国家规定的不同动物间关节腔内注射剂量换算计算公式，结合目前的动物实验给药方法、剂量和换算方法，采用自定关节腔内注射剂量计算公式）：动物与人等效剂量的换算公式，即：实验动物每只给药剂量（ml）＝人的关节腔给药剂量（ml）×家兔等效剂量的体型系数/人等效剂量的体型系数×（人的平均体重/平均实验动物体重）2/3≈0.3521ml，计算损耗后基本定为0.40ml。 　　2 观察指标及方法 　　每组分别于术后4W，8 W，10 W和14 W以空气栓塞法各处死5只家兔，进行检查。关节软骨形态色泽，损伤与修复：术后4W，处死动物后见关节液清亮，关节囊无挛缩、粘连和新生物形成，滑膜无充血水肿，软骨有损伤，失完整性。术后8 W，修复组织呈黄白色外观，表面粗糙；呈连绵的小丘状，与周围关节软骨分界清楚。术后10W，修复组织亦较以前为多，淡黄白色，表面变的光滑，有一定弹性，与周围正常软骨分界仍能辨认。 　　术后14W，修复组织色泽、质地同正常关节软骨，表面光滑，与周围软骨组织界面平齐并完全整合，结合紧密，不易剥离，与周围正常软骨组织界限模糊。 　　膝关节外周径测量：二组动物分别于造模前在关节处用染色笔标出部位，分别于注射药物后第4W ，8W，10W测量周径，差值做比较，将各组计量资料用均数±标准差表示，差异的显著性用随机区组设计的方差分析，各组之间的比较用SNK-Q检验进行统计学分析。 　　组织学观察： 　　术后8W，对照组见缺损区凹陷，有血凝块，被覆纤维组织，甲苯胺兰染色呈无异染性着色的纤维组织；香丹组见少量增殖的类似幼稚软骨细胞的细胞和较少的基质，细胞形态较小，甲苯胺兰染色异染性不明显，未见明显的多核炎性细胞。 　　术后10W，对照组缺损区有纤维组织覆盖,有原纤维形成，呈波纹状走行，修复组织异染，少而不均匀；香丹组可见到较多的类幼稚软骨细胞