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香榧茎段离体培养再生植株研究 　　摘　要：对香榧茎段不定芽诱导研究的结果表明，不定芽诱导的最佳培养条件为：培养基为B5+KT0.1 mg／L+IBA0.5mg／L+0.08％活性炭+2％葡萄糖，培养温度为20 ℃，光强不高于400 lx，该条件下的不定芽诱导率可达55％。将不定芽培养在1／2 B5+IBA 0.1 mg／L+0.08％活性炭+2％葡萄糖的生根培养基上，生根率最高达到40％。通过器官发生途径国内外首次建立了香榧离体再生体系和快繁体系，并获得了完整的再生植株，为今后开展香榧的遗传转化和品种改良奠定了基础。 　　关键词：香榧；茎段；不定芽；再生植株 　　中图分类号：S664．5　文献标识码：A　文章编号：1009-9980(2007)04-477-06 　　 　　香榧(Torreya grandis cv.Merrillii)属红豆杉科香榧属，第三纪孑遗植物，是我国特有的珍稀经济林树种。它集果用、油用、药用、材用和绿化观赏为一体，经济价值非常高。香榧种子胚乳含有营养丰富的油脂、碳水化合物、蛋白质和氨基酸，是我国著名的干果和食用油原料之一。种仁炒熟后松脆可口，营养丰富，香味独特。种仁可入药，有化痰、止咳、润肺、明目、杀虫、杀菌的功效。香榧油可预防血管硬化、冠心病。另外，香榧与红豆杉一样，也含具有抗癌活性的生理活性物质――紫杉醇圈。寻找和扩大紫杉醇的药源途径，以及通过细胞培养而研究生物碱特性方面的研究已引起科学家们的极大兴趣。由于香榧的珍贵及其较高的开发利用价值，因此，近年来，学者们对香榧的研究报道逐渐增多，但研究领域主要集中在资源、栽培和良种选育等方面。随着生物技术的发展和研究手段的进步，对香榧的探讨已进入细胞水平和分子水平的深层研究。 　　 　　香榧为雌雄异株，偶有两性株，自然条件下，种子萌发缓慢，繁殖周期长，现有的繁殖方式如实生播种、嫁接、扦插法，成苗比较困难，成活率低，难以满足生产上的要求。生产中香榧繁殖与生长速度都很慢，加之砧木种子都是混采混播，实生后代性状发生分离或变异，影响优良单株嫁接后的纯度和一致性。因此，利用香榧成年树的茎段为外植体进行快速繁殖可以大大缩短童期，并能保持种苗的纯度和一致性，这对于香榧产业的开发和增加农民收入意义十分重大。由于榧属植物组织培养相当困难，至今国内外还没有用香榧营养器官作外植体开展组织培养的报道。我们通过器官发生途径建立香榧离体再生体系和快繁体系，以期为种质改良和遗传转化提供科学依据和技术支撑。 　　 　　1　材料和方法 　　 　　1．1　材料 　　供试材料香榧茎段采自浙江省诸暨市林业局与赵家镇钟家岭资源圃中保存的优系。选取当年生健壮无病虫害的嫩梢，带回实验室，置于4℃冰箱保存。 　　嫩梢经流水冲洗2 h后，在超净工作台上用体积分数75％L醇表面消毒1 min，0.1％HgCl2浸泡灭菌8 min，无菌水冲洗4次，切成0.5～1 cm的小段，接种于B5附加KT0.1～1.0 mg／L和NAA O.1～2.0 mg／L、IBA 0.1～2.1 mg／L不同激素配比的培养基中诱导不定芽，每瓶接5个，每个处理4瓶，重复3次。诱导和继代的基本培养基为B5，均添加质量分数0.5％的琼脂，质量分数2％的葡萄糖和0.08％活性炭。pH 5.8。培养基在121％下高压菌18 min。培养室温度为(21±1)℃，光照16 h／d，光照强度400 lx。 　　 　　1．2　基本培养基的筛选 　　以茎段为外值体，在B5、1／285、SH、MS、BW、WPM、White 7种基本培养基上进行培养．每处理分别添加KT 0.1 mg／L+IBA 0.5 mg／L，观察茎段生长情况。40 d后统计外植体成活率。 　　 　　1．3　低温、不同光照强度和培养温度处理 　　 　　将接种于B5+KT 0.1 mg／L+IBA 0.5 mg／L培养基上的茎段，分别置于4℃的冰箱内低温处理0、3、7、14、21、28 d后，取出在室温下继续培养40 d。统计分析低温处理对外植体成活率的影响。 　　将接种于以上培养基上的茎段，先4℃低温处理3 d，再分别置于1 600、800、400 lx及黑暗条件下培养40 d，统计分析光照处理对外植体成活率的影响。 　　将接种在上述培养基上的外植体材料，4℃低温处理3 d后，再分别置于15、18、21、24、27、30℃光照强度为400 lx的光照培养箱中培养40 d。统计分析培养温度对外植体成活率的影响。 　　 　　1．4　不同季节的茎段对不定芽诱导时间和诱导率的影响 　　 　　分别于2004年和2005年的4月、6月、10月和12月下旬采集当年生和2年生茎段，接种于诱导不定芽培养基(1／2Bs+KT 0.1 mg／L+IBA