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香水百合组织培养和快速繁殖条件优化 　　摘要：以香水百合无菌试管苗小鳞茎作为外植体，从外植物体创伤、基本培养基、植物生长调节剂的配比以及培养基的物理状态等几个方面研究了百合鳞茎增殖的最优条件，并对百合组培苗的生根条件进行了优化。结果表明，一定的外植体创伤处理、氮元素含量较高的基本培养基和合适的植物生长调节剂浓度组合有利于鳞茎的增殖，香水百合鳞茎最佳增殖培养基配方为N6+0.2 mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA；在MS+1.5 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA培养基中，液体培养的鳞茎增殖倍数极显著高于固体培养；香水百合小苗的最佳生根培养基配方为1/2MS+0.2 mg/L NAA+0.5 mg/L IBA。 　　关键词：百合；增殖；创伤；液体培养；培养条件；植物生长调节剂 　　中图分类号： 682.2+90.4+3文献标志码： 　　文章编号：1002-1302（2016）08-0081-05 　　百合（Lilium spp.）是指百合科百合属多年生球根花卉，其花色鲜艳、花姿雅致，具有较高的观赏价值和药用价值。香水百合是百合中的“女王”，因其花大、芳香宜人、清雅脱俗而深受欢迎，主要做切花观赏制成花束和花篮[1]。目前，中国香水百合的种球主要依赖进口，百合新品种的选育和商品种球的供应已成为制约我国百合产业发展的“瓶颈”问题，实现优质百合种球的国产化具有重要的现实意义，而国内的种苗繁殖方法以分球繁殖为主，有时也采用鳞片扦插，但以小鳞茎分株法及鳞片扦插法繁殖，繁殖率低，且长期的营养繁殖易使其感染病毒而降低花的质量，应用组培方法实现百合工业化生产是解决这一问题的有效途径。目前，我国学者对香水百合的组织培养进行了相关研究，但主要集中以鳞片、叶片、花器官等为外植体的固体培养基诱导再生植株上[2-9]。本研究以香水百合无菌试管苗鳞茎为外植体，探讨外植体创伤、基本培养基、植物生长调节剂的配比以及培养基的物理状态探究对小鳞茎增殖的影响，筛选出最适宜培养基配方、培养方式以及生根培养基配方，以期为香水百合组培苗的工厂化大生产提供依据。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　香水百合无菌试管苗由武汉生物工程学院细胞工程实验室提供。 　　1.2方法 　　1.2.1创伤处理对百合小鳞茎增殖的影响 　　选用大小相似、长势较好的无性系香水百合小鳞茎作为本试验的外植体材料，切割成0.5 cm×0.5 cm的小块。1组对小块做切割处理（平行切割3刀），1组不进行任何处理作为对照，接种到 MS+20 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+3%蔗糖+0.7%琼脂的培养基中，pH值5.8，每瓶接 8个小鳞茎，共接30瓶。 　　培养条件为先暗培养15 d，然后放到光下培养。培养30 d 后，统计肉眼可以区分的香水百合小鳞茎个数，计算小鳞茎增殖系数（Q）=统计的小鳞茎个数/接种个数。 　　1.2.2不同增殖培养对百合小鳞茎增殖的影响 　　将无菌试管小苗切除叶片及根部，接种到15种不同增殖培养基中（表1），每瓶接种8个小鳞茎，共接30瓶。50 d后统计并计算能增殖的小鳞茎百分率、增殖系数和增加的质量。能增殖的小鳞茎百分率=分化的外植体数/接种的外植体数×100%。增殖率=增殖出的小鳞茎数/接种的小鳞茎数×100%。 　　1.2.3培养基不同物理状态对百合小鳞茎增殖的影响以MS+1.5 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+3%蔗糖+0.7%琼脂，pH值5.8为基本培养基，分装在50 mL的锥形瓶中，每瓶分装20 mL；液体培养基中不加琼脂但是加入定量的脱脂棉；液体培养基分装在250 mL的锥形瓶中，每瓶分装100 mL，并且加入0.3 g脱脂棉，灭菌备用。 　　选用大小相近长势较好的香水百合小鳞茎，将外植体切割成大小为0.5 cm×0.5 cm的小块，接种到培养基上，每瓶均接种4个，共30瓶。摇床转速：100 r/min。培养30 d后，统计香水百合小鳞茎个数，计算小鳞茎增殖系数。 　　1.2.4香水百合小苗生根 　　将增殖培养得到的香水百合鳞茎接种于壮苗培养基上培养，百合鳞茎壮苗培养基的配方为MS+0.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L GA+3%蔗糖+0.7%琼脂，pH值5.8。将经过壮苗培养获得的生长健壮的百合小苗，接种到不同生长调节剂浓度的生根培养基上培养（表2）。每瓶接种6棵小苗，共接8瓶，30 d后统计在各个培养基上的生根情况，包括生根小苗数量、生根数、根长及生根率。生根率=生根外植体数/接种的外植体数×100%。 　　1.2.5培养条件和数据分析 　　以上培?B基除特别说明外，其余的均加入3%蔗糖+0.7%琼脂，pH值5.8。培养条件：培养温度为25