CRISPRCas9基因编辑技术在脑科学中应用策略.PDFVIP

2017 年 第 62 卷 第 31 期：3583 ~ 3593 《中国科学》杂志社 评 述 SCIENCE CHINA PRESS CRISPR/Cas9 基因编辑技术在脑科学中的应用策略 1,2 1* 张骑鹏 , 孙安阳 1. 上海健康医学院脑退行性疾病重点实验室, 上海 201318; 2. 南京大学生命科学学院, 南京 210023 * 联系人, E-mail: sunay@ 2017-06-15 收稿, 2017-08-14 修回, 2017-08-17 接受, 2017-09-14 网络版发表 摘要 基因编辑是对生物体基因组的目标基因进行精确切割、插入等操作. CRISPR/Cas9技术是基于向导RNA 识别DNA靶序列, Cas9蛋白作为核酸酶切割DNA靶点来实现基因编辑. 该技术自2012年报道以来已被不断改进, 因具有普适、高效、简便等优点, 迅速成为现阶段应用最广的基因编辑技术. 在脑科学领域, CRISPR/Cas9技术不 仅可应用于离体神经细胞, 也可以在受精卵期、胚胎期或成年期应用; 应用目的涉及脑基因与功能研究、基因敲 除/ 敲入小鼠模型的构建、某些疾病的实验性治疗等. 尤其是在一些遗传性疾病如视网膜色素变性、亨廷顿病的动 物模型上, CRISPR/Cas9方法已经初步展示了令人鼓舞的治疗效果. 未来, 该技术将会在精确编辑效率与可控性方 面有进一步提升, 并可能在脑定向导入方法、脑神经环路解析等专业应用环节获得显著的发展. 关键词 CRISPR/Cas9, 基因编辑, 基因敲除, 基因敲入, 神经科学 20世纪80年代, 第一只转基因小鼠的诞生标志 域连接而成, 后者要以二聚体的形式发挥酶切效应. 着人类在哺乳动物上进行基因修饰的开始. 初代转 ZFN 的每个锌指蛋白识别并结合DNA链上一个特异 基因技术是采用原核注射或病毒感染等手段将外源 的三联碱基, 因是一对三的方式, 在设计多个锌指蛋 性DNA导入细胞核, 再经随机插入的方式整合进受 白串联排列时需要考虑上下文关联效应. TALEN技 体生物的基因组. 随后又通过同源重组机制[1]发展了 术的每个TALE蛋白结构单元可识别DNA链上一个 基因打靶技术, 以提高基因修饰的精度. 迄今, 经由 碱基, 因是一对一的方式, 所以设计更加灵活, 可靶 胚胎干细胞基因打靶方法已成功制备了上千种基因 向较长序列. 然而, 大量高度保守的TALE蛋白模块 突变小鼠, 极大地推动现代生物学与医学的发展. 然 组装涉及繁琐的分子克隆技术, 模块序列高度重复 而, 基因打靶技术操作费时费力, 制约了它成为一种 也可能妨碍后期的病毒包装. CRISPR/Cas9技术采用 普适、快捷的基因修饰技术常规应用. 向导RNA识别DNA靶序列, 以Cas9蛋白作为核酸酶 基于识别DNA靶点的方法不同, 近十余年主要 切割DNA靶点. 很显然, 这种依靠RNA识别DNA靶 产生了3种位点特异性基因编辑技术: 锌指蛋白核酸 序列的技术比前两种以蛋白识别DNA靶序列的技术 酶(zinc-finger nuclease, ZFN)、转录激活样效应因子 更为简便,