蛋白质的等电点测定与沉淀实验.docVIP

实验项目一、蛋白质的等电点测定及沉淀反应 姓 名： 指导教师： 实验室： 组员： 成绩： 第三部分：实验记录与分析 实验现象记录及分析： （一）蛋白质等电点测定 管号 pH值 混浊度 解释现象 1 ?5.9 ?-- ?未达到蛋白质的等电点，蛋白质颗粒上正负电荷过少。 2 ?5.5 ?++ ?接近蛋白质的等电点，蛋白质颗粒上正电荷不多，沉淀减少。 3 ?4.7 ?+++ ?达到蛋白质的等电点，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等蛋白质颗粒因失去电荷和脱水而沉淀。 4 3.5? ?+ ?大于蛋白质的等电点，蛋白质颗粒上正电荷大于负电荷，产生较少沉淀。 （二）蛋白质的盐析 1．蛋白质的盐析 ? 现 象 解 释 蛋白质溶液中 加硫酸铵溶液 ?有沉淀产生 ?无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。 沉淀中加水 ?沉淀溶解 ?由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，蛋白质的盐析作用是可逆的。 上清液中加硫 酸铵粉末 ?有沉淀产生 ?硫酸铵粉末是强电解质，引起蛋白质胶体的凝聚沉淀。 沉淀中加水 ?沉淀不溶解 ?此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于水。 2．重金属离子沉淀蛋白质 ? 现 象 解 释 蛋白质溶液中 加硝酸银 ?有沉淀产生 ?重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。 沉淀中加水 ?沉淀不溶解 ?此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于水。 3．有机酸沉淀蛋白质 ? 现 象 解 释 蛋白质溶液中 加三氯乙酸 ?有沉淀产生 ?有机酸使蛋白质变性而沉淀。 沉淀中加水 ?沉淀不溶解 ?此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于水。 4．有机溶剂沉淀蛋白质 现 象 解 释 ?有沉淀产生 ?此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀。 5．乙醇引起的变性与沉淀 管 号 操作 现 象 解 释 1 振荡混匀 ?有沉淀产生 ?乙醇能析出蛋白质。 加数滴盐酸 ?沉淀溶解 ?此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质仍能溶解于水，并保持其天然性质而不变性。 2 振荡混匀 ?没有明显现象 ?溶液呈碱性，偏离等电点。 醋酸中和 ?有沉淀产生，溶液变为黄色 ?醋酸与氢氧化钠反应，生成醋酸钠，达到等电点，甲基红使溶液呈黄色 加数滴盐酸 ?沉淀溶解，溶液颜色变浅 ?盐酸中和氢氧化钠，使溶液呈中性。 3 振荡混匀 ?没有明显现象 ?溶液呈酸性，未达到等电点。 碳酸钠中和 ?有沉淀产生，溶液变为红色 ?蛋白质与溶液中的离子反应产生沉淀，溶液呈酸性所以显红色。 加数滴盐酸 ?沉淀溶解，溶液颜色变浅 ?未达到蛋白质的等电点，沉淀溶解。 第四部分：课后研讨题 1.通过本次合作实验后，有否对该项目改进的合理建议。 适当增加对照组和空白组，使实验数据更加科学可信。 2.鸡蛋清为何可做铅、汞中毒的解素剂？ 铅、汞是重金属离子，与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重大改变，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。 3.氯化汞为何能做为杀菌剂？ 细菌由蛋白质构成，氧化汞是重金属盐，与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重大改变，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。 4.在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀 ？ 蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在水溶液中的蛋白质分子由于表面生产水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。 5.将本实验中所涉及到的几种蛋白质沉淀方法各举一应用实例加以说明。 （1）盐析：硫酸铵的浓溶液能析出蛋白质。 （2）乙醇引起的变性与沉淀：低温下用乙醇或丙酮短时间作用于蛋白质，用于提纯蛋白质。 （3）重金属离子沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml的蛋白质溶液，再加入3%硝酸银溶液1-2滴，振荡试管，观察现象。 （4）某些有机酸沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml蛋白质溶液，再加入1ml 5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察现象。 （5）有机溶剂沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml蛋白质溶液，再加入2ml 95%乙醇，观察现象。 教师评阅： 签名