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鸡大肠杆菌分离培养与鉴定 　　摘 要：大肠杆菌病是目前对养鸡场影响较为严重的肠道疾病，越来越引起广大养殖户的重视。本实验对周口养鸡场病鸡进行解剖，对肝脏和卵巢进行大肠杆菌的分离，并对其培养并用革兰氏染色法鉴定。结果表明，成功的分离出大肠杆菌，革兰氏染色可见阴性的短小杆菌，心血中的内毒素则呈阳性。这为养殖场进行大规模剔除大肠杆菌的病鸡提供了便利。 　　关键词：大肠杆菌；革兰氏染色 　　中图分类号：R378.2+1 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20160903001 　　鸡大肠杆菌病是由某血清型的致病性大肠埃希氏菌引起的鸡的非肠道性传染性疾病的总称[1]。大肠杆菌病是临床常见多发病，虽不是难治之症，但此病一旦发生就很难控制，相对来说防大于治。混合感染下，不但要选取恰当的抗菌素或抗生素药物对病原体进行有效打击，还要把产生免疫抑制的病毒进行处理并提高机体的免疫力，这样就能使整个治疗过程不会复发，而且是治病之本。 　　畜牧业的发展使得人民的生活质量越来越高，对动物产品质量的要求也越来越高，这就需要不断提高养殖场的饲养管理水平，饲养技术水平，从而减少常见疾病的发生率，有效防治各种疾病，确保动物产品的质量，提高经济效益。 　　本实验对病鸡肝脏和卵巢进行大肠杆菌的分离、培养并用革兰氏染色鉴定，为后期细菌鉴定和合理用药提供参考。本论文通过微生物学的方法，对周口西华养殖场鸡疑似大肠杆菌病进行了确诊。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与样品 　　取病鸡2只，按照无菌操作技术打开腹腔，采集肝脏和卵巢作为病料。麦康凯琼脂（蛋白胨20g，牛肉浸膏5g，乳糖10g，葡萄糖1g，氯化钠5g，硫代硫酸钠0.2g，硫酸亚铁0.2g，琼脂粉20g，0.4%酚红水溶液6.3mL，蒸馏水1000mL，除酚红指示剂外，各成分加热溶解，调至pH7.4，然后加入酚红指示剂，分装入试管；115℃高压蒸气灭菌15min后，制成底层较深的斜面）[2]。胰蛋白胨水溶液（蛋白胨2.5g，氯化钠1.25g，蒸馏水250mL，溶解后调pH为7.6，分装于试管，每管4～5mL，121℃高压蒸气灭菌15min）[2]。葡萄糖蛋白胨水溶液（每100mLpH7.6的邓亨氏蛋白胨水中加入葡萄糖1g，溶解后分装于试管，每管1mL，121℃高压蒸气灭菌15min）。 　　1.2 细菌的分离培养与鉴定 　　取采集的肝和卵巢病料，划线接种于麦康凯平板，接种所有工作均采用无菌操作。挑取可疑细菌的的典型菌落接种在麦康凯平板上，37℃环境下培养24h后，挑取粉红色单个菌落在麦康凯培养基上划线分区，37℃环境下再培养24h，连续培养3代，得到细菌的纯培养物，并进行革兰氏染色镜检[3]。 　　2 结果与分析 　　2.1 镜检结果 　　在麦康凯培养基的表面可见表面光滑、边缘整齐、圆形隆起的红色菌落并分离到3株疑似大肠杆菌菌株。革兰氏染色镜检，视野中可见大量散在排列，形态均一，2端钝圆的革兰氏阴性红色短杆菌[4]。 　　2.2 菌落状态 　　细菌分离在普通琼脂平板上长出表面光滑，半透明，中等大小，露珠样的圆形菌落，挑血液琼脂平板上检测的菌落较大，边缘整齐，灰白色，多不溶血，在麦康凯琼脂平板上，形成中等大小的砖红色菌落，取菌落涂片，自然干燥，革兰氏染色，镜检，可见阴性的短小杆菌，心血中的内毒素则呈阳性[4]。根据生化特性，表明分离菌为大肠杆菌。 　　3 讨论 　　大肠杆菌是一种常见多发病，近年来，人们一直将它视为肠道正常菌群而不予重视，但忽略了致病性大肠杆菌很容易与其他病原（如支原体等）合并感染，也常常继发于其他疾病（如新城疫、传染性支气管炎等疾病）感染之后。致病性大肠杆菌是危害养殖业的重要病菌，室内空气中湿度越大，大肠杆菌的发病机率就越大。在严冬，若紧闭门窗只注意保温，则常造成鸡舍通风不良，缺氧，舍内潮湿，CO2和氨气含量增大，致使肉仔鸡血氧供应不足，呼吸道发生损害，也能引发大肠杆菌病。如果鸡舍温差过大或温度突升突降，抑或是天气长时间干燥，导致鸡舍内干燥也是不利的影响。舍内的杂草、垃圾、残留羽毛、粪便、病死鸡只等杂物更是鸡群患病的关键，如不及时清理，后果极其严重[5]。此外，鸡舍中的有害气体和粉尘，如NH3、CO、CO2和SO2等也会对肺泡结构有破坏作用，同时肉鸡在有害气体浓度较高的不良环境下生存，机体代谢还会进一步增高，就可能引发大肠杆菌的混合症状。 　　机体组织对疾病的抵抗离不开其自身的免疫力，如果在实际生产中，鸡只一旦感染某些疾病，就会破坏其正常的免疫程序，降低免疫功能，从而造成感染。而大肠杆菌是极易敏感菌，一旦感染就会引发其他疾病，给养殖户造成不可收拾的局面。 　　尽管致病性大肠杆菌的血清型有很多，但其致病的机理十分相似，即感染机体后，通过