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鸡柔嫩艾美尔球虫基因重组疫苗研究现状 　　摘要：鸡球虫病是鸡主要的寄生虫病，柔嫩艾美耳球虫是毒力最强的球虫病病原，给养鸡业造成巨大的经济损失，防治该病的疫苗有强毒苗、弱毒苗和基因工程苗。由于活疫苗有自身无法克服的缺点，基因工程疫苗受到极大重视，特别是重组表达亚单位疫苗和重组DNA疫苗，论文对这两种基因重组疫苗的研究现状进行综述。 　　关键词：鸡柔嫩艾美耳球虫；疫苗；基因重组苗 　　中图分类号： S859.797 文献标识码： A 文章编号： 1674-0432（2013）-08-82-2 　　鸡球虫病是由属于顶复门、孢子虫纲、真球虫目、艾美耳科、艾美耳属的原虫寄生于鸡肠道引起的疾病，由于其造成雏鸡大量死亡，耐过的鸡只因为消化功能障碍，饲料转化率下降，生长发育缓慢而出现生产性能下降问题，给养鸡业造成巨大损失。感染鸡的球虫主要有柔嫩艾美耳球虫（E.tenella），堆型艾美耳球虫（E.acervulina），早熟艾美耳球虫（E.praecox），巨型艾美耳球虫（E.maxima），布氏艾美耳球虫（E.brunetti），毒害艾美耳球虫（E.necatrix）以及和缓艾美耳球虫（E.mitis）[1]。其中，柔嫩艾美耳球虫虫株是该属球虫中毒力最强、危害性最大的虫种，并且与其他球虫株之间几乎无交叉反应，给养鸡业带来极大的危害，据Allen报道全世界每年因此病造成经济损失超过80亿[2]。 　　1 重组表达亚单位疫苗 　　基因重组表达亚单位疫苗是利用DNA重组技术，将编码E.tenella保护性抗原基因导入受体细菌或者细胞，使其在受体中高效表达，分泌保护性抗原肽链，然后提取保护性抗原肽链，加入佐剂即成。基因重组表达亚单位疫苗的候选基因有5401、SO7、3-1E、 MZ5-7和表面抗原SAG5、SAG10、SAG13、SAG 14等。 　　H. D. Danforth[3]等于1989年开启了对鸡球虫基因重组表达亚单位疫苗的篇章，他们把柔嫩艾美耳球虫子孢子表面抗原5401导入到大肠杆菌中与β-galactosidase 融合表达，添加弗氏完全佐剂配制疫苗，经该重组疫苗皮下免疫一次的鸡在攻毒后的损害评分明显低于对照组，增重效率则明显高于对照组。Du Aifang [4]等，使用编码艾美耳球虫5401抗原转入到致弱沙门氏菌中制备的重组疫苗，试验表明最多有55%的保护力。 　　SO7是位于子??子折光体上的一种抗原。M. S. Crane[5]等的研究发现重组表达的E. tenella SO7抗原免疫鸡只，不但能保护受到同源株攻毒的鸡，同样也能保护受到E. acervulina， E. maxima 和 E. necatrix攻毒的鸡。Christian Klotz[6]等， 用SO7抗原与两种不同的真核表达载体构成的重组疫苗，做免疫保护性试验，均能够减少排卵量，具有部分保护力，而且对其他球虫也有一定的交叉保护，说明SO7抗原可以作为候选疫苗。 　　麦博等[7]将E.tenella表面抗原SAG10做原核表达后将重组蛋白以lOOug/只肌肉注射免疫雏鸡，攻虫后观察免疫效果，免疫组抗球虫指数为152.13。说明重组表达的EtSAGl0可诱导雏鸡产生一定的抗球虫免疫保护。E.tenella表面抗原SAG13和SAG14[8]，SAG2和SAG7[9] SAG5[10]做原核表达，将可溶性蛋白免疫雏鸡，攻毒后检测其重组蛋白的免疫保护效果，结果表明，这些重组表达蛋白均有一定的抗球虫保护力。 　　Millter[11]等于1989年用抗Etenella子抱子28KD的单抗Mabl209从cDNA文库中筛选出GX3262基因，表达的融合蛋白分子量为115kDa，试验表明用该重组抗原免疫幼龄肉鸡对感染艾美耳球虫卵囊产生明显的部分保护作用。 　　B. M. Subramanian[12]等的研究发现一个来自于E. tenella 微线体的能激发宿主鸡的体液和细胞免疫反应的抗原EtMIC1，重组表达的EtMIC1能提供受试鸡部分的免疫保护。 　　Ralf.Hosse[13]等首次克隆表达出柔嫩艾美耳球虫的89kDa亲环蛋白 EtCTP89，在E.tenella整个生活史中表达，其从CsA到Cyps具有紧密联系，研究表明亲环蛋白A具有抗球虫作用。Nishinaka S[14]等从母系的无胸苷激酶活性的R27H1和 R27H4与鸡的B细胞系MuH1 和MuH4融合制备单克隆抗体，研究表明能产生IgG。Clarke Lorraine E等克隆EtHL6抗原，该抗原能在Eimeria tenella的子孢子和第二代裂殖子阶段表达，结果表明具有一定的保护作用。 　　2 重组DNA疫苗 　　重组DNA疫苗是将一种或者几种抗原基因重组到表达载体