鸡精液稀释液中添加三种多糖对种蛋孵化率影响.docVIP

鸡精液稀释液中添加三种多糖对种蛋孵化率影响 　　摘要：采用腹背联合按摩法采集鸡精液，预处理后添加含有不同浓度的红景天多糖、枸杞多糖和海带多糖冷冻稀释液进行稀释，检测冷冻解冻后鸡精子的活率、质膜完整率、线粒体活性、顶体完整率。结果表明红景天多糖、枸杞多糖、海带多糖最佳添加量分别为1.00、0.75、0.50 mg/mL，精子冻后活率稳定在40%以上。 　　关键词：鸡精液；红景天多糖；枸杞多糖；海带多糖；种蛋孵化率 　　中图分类号：S814.3；S831 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2018）01-0005-02 　　随着人们对禽类食品需求量的日益增加，中国养禽业规模化与集约化程度逐年提高，人工授精技术在养禽业得到了快速发展。笼养鸡的人工输精大多采用原精，但原精输精存在一定的缺陷，公鸡射精量少、精子密度大、在高温条件下体外存活时间短，在公鸡使用的早期和晚期易出现精液缺乏现象，鸡精液稀释技术可有效解决这类问题[1]。好的稀释液不仅可以提供精子生存活动的良好环境，并且将其稀释可以使密度高、容量低的鸡精液分布均匀，能够扩大其精液量，增强其授精能力[2]。本试验主要确定红景天多糖、海带多糖、枸杞多糖在鸡精液稀释液中的最佳作用浓度，以提高鸡人工输精后的种蛋孵化率和健雏率。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验动物 　　选择宁夏晓鸣农牧股份有限公司的冠大而鲜红、性反射功能好、精液品质符合要求的20只50周龄公鸡，根据日常输精划分为两组，两组公鸡轮换使用，采精2 d，休息1 d。 　　1.2 试验仪器与试剂 　　进口液氮罐（TAYLOR-WHARTON）；超纯水制备器（PureLabTMPlus，Pall公司，德国）；生物冷冻仪（BIOTRONICS LIMIED，英国）；倒置荧光显微镜（NIKON120型，日本）；全自动高速离心机（Heraeus，德国）；高压消毒柜（Thermo电子公司，美国）；保温水壶、冰箱、水浴锅等。 　　D-葡萄糖（0188-500 g）、D-果糖（F2793-500 mg）、二水柠檬酸三钠（S4641-500 g）、柠檬酸（北京世纪星化工有限责任公司）、碳酸氢钠、Tris、EDTA、甘油、氯化钠、氯化钾、青霉素G钾（P-7794）、硫酸链霉素（0382-25 g）、甘油（0854-100 mL）、卵?S、碘化丙啶、罗丹明123、FITC-PNA、双蒸水等。 　　红景天多糖标准品、枸杞多糖标准品、海带多糖标准品购自上海源叶生物公司。 　　冷冻基础液TCG：葡萄糖1.1 g，柠檬酸1.48 g，Tris 2.42 g，青霉素钠0.06 g，硫酸链霉素0.1 g，加双蒸水至100 mL，调节pH至6.21，渗透压286 mOsm/L。 　　精子低渗液：二水柠檬酸钠0.735 g，果糖1.351 g，加双蒸水至100 mL。 　　冷冻保存I液：冷冻基础液加20%（V/V）的卵黄。 　　冷冻保存II液：冷冻保存I液添加不同体积比的甘油。 　　1.3 精液处理 　　将合格的精液保存在保温壶（32～35 ℃）中，带回实验室后分装，按照所采精液密度的大小每个离心管分装5～10 mL，加等量的BTS液，纱布包裹，15 ℃下平衡3 h。800 g离心10 min，取出，弃上清。加入I液（80%TCG+20%卵黄），按1∶2稀释。在4 ℃下平衡3 h后，添加甘油使其最终浓度为3%，最终稀释倍数为1∶3。在4 ℃下平衡1～2 h。用细管分装，封口。然后放入程序冷冻仪中以1 ℃/min从5 ℃降到-5 ℃，迅速取出放置于自制冷冻盒中，在距液氮面3 cm处熏蒸3 min。将超低温温度计探针与冷冻槽连接，当温度降到-120 ℃时迅速投入液氮保存。解冻，放置37 ℃培养箱中待测。 　　1.4 统计分析 　　应用SPSS18.0软件进行显著性检验，数据均用平均数±标准差表示，P0.05表示差异显著。 　　2 试验设计 　　在试验中分别添加浓度梯度为0.25、0.50、0.75、1.00、1.25 mg/mL红景天多糖、海带多糖、枸杞多糖，同时以TCG作为的对照，比较解冻后精子的活率、质膜完整率、线粒体活性、顶体完整率。 　　3 结果与分析 　　3.1 不同浓度红景天多糖对公鸡精子冷冻解冻效果的影响 　　不同浓度红景天多糖对公鸡精子冷冻解冻效果的影响见表1。由表1可见，添加不同浓度梯度的红景天多糖均可提高公鸡精子冻后活率、质膜完整率，顶体完整率、线粒体活性等质量参数。其中以添加1.00 mg/mL的效果最好。 　　3.2 不同浓度枸杞多糖对公鸡精子冷冻解冻效果的影响 　　不同浓度枸杞多糖对公鸡精子冷冻解冻效果的影响见表2。由表2可见，添加不同浓度梯度的枸杞多糖均可提高公鸡精子冻后活