鸡源Iss抗血清对鸡大肠埃希菌O2O78CVCC1551抑制作用.docVIP

鸡源Iss抗血清对鸡大肠埃希菌O2O78CVCC1551抑制作用 　　摘要：为探讨Iss抗体对鸡大肠埃希菌（Escherichia coli）血清抗性的抑制作用，将纯化的Iss融合蛋白免疫雏鸡而获得抗血清，并对3株鸡大肠埃希菌株O2、O78、CVCC1551进行血清抗性抑制试验，分析Iss抗血清对鸡大肠埃希菌血清抗性的抑制作用。结果表明，抗血清对O2、O78、CVCC1551等3株致病性-血清抗性，但iss基因氨基酸序列不同的大肠杆菌均产生抑制作用，且抑制作用的程度与抗血清含量有关。 　　关键词：鸡大肠埃希菌（Escherichia coli）；Iss抗血清；抑制作用 　　中图分类号：S852.4；S831 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）14-2725-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.14.032 　　Abstract： To explore the inhibition of Iss antiserum to the Escherichia coli，the Iss fusion protein was purified and immuned to chickens. The serum resistances of 3 strains were detected after processed by antiserum and negative serum， the inhibition effect of Iss antiserum on E.coli serum resistance was examined. The results showed that Iss antiserum has the inhibition effect on the O2，O78 and CVCC1551，which were virulent-serum resistant stains，and the inhibition rate was related to content of antiserum. 　　Key words： avian Escherichia coli； Iss antiserum； inhibition 　　大肠埃希氏菌（Escherichia coli）可引起人畜共患的?菌性传染病，病型复杂，其中危害最大的是急性败血型。大肠杆菌的毒力是由多种毒力因子共同作用的，包括黏附素、1型菌毛、毒素、外膜蛋白、ColV质粒、补体抗性、铁转运系统、宿主细胞表面改变因子等[1-4]。血清抗性可能受荚膜抗原、脂多糖和特定外膜蛋白调节，在多数菌株中表现出与毒力相关。iss基因编码的外膜蛋白可能通过调节细胞表面上对补体膜攻击复合体敏感的位点，导致表面排斥，使菌体具有抗血清补体溶菌能力[5-7]。 　　若能抑制菌株的血清抗性（补体抗性），降低菌株在血液中的存活和增殖能力，可减缓大肠杆菌病的进程，尤其是减少败血症的发生。本试验制备鸡源Iss抗血清，并探讨Iss抗血清对大肠埃希菌血清抗性的抑制作用，为大肠杆菌病的防制提供新的研究方向，并有利于食品安全的防控。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 菌株来源 CVCC1551、O78购于中国兽医药品监察所；O2为北京发病鸡场分离，经中国兽医药品监察所鉴定的强毒株，由东北农业大学预防兽医教研室170 mL/L甘油于-70 ℃冻存保存。其中CVCC1551、O2菌株iss基因序列一致，O78菌株核酸序列与O2的同源性99.4%，氨基酸序列同源性98%。 　　1.1.2 试剂 LB肉汤、麦康凯琼脂、大肠杆菌大肠菌群测试片购自青岛高科技园海博生物技术有限公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1 雏鸡致死试验 将待测大肠杆菌分别划板，挑取平板上的单菌落，将细菌置于LB液体培养基中37 ℃振荡培养过夜，离心，经PBS洗2次，并用PBS溶液倍比稀释。1日龄雏鸡买回后适应环境1 d，取0.2 mL稀释液经大腿肌肉注射2日龄雏鸡，约108 CFU/只，每组5只。连续观察7 d，每天计死亡数，并对死亡雏鸡进行剖检，取心、血、肝、脾于麦康凯平板上划线，检测大肠埃希菌感染情况[2，5]。 　　1.2.2 鸡源抗血清的制备 纯化的Iss融合蛋白0.1 mg与弗氏佐剂1∶1乳化[3]。14日龄雏鸡，皮下注射常规免疫。对照组注射PBS与弗氏佐剂乳化液[4]。四免7 d后加强免疫1次，5 d后取血，效价为1∶100，于-20 ℃保存备用。临用前56 ℃ 30 min灭活补体[1，2，8]。 　　1.2.3 Iss抗血清对菌株血清抗性抑制作用的检测 1∶100接菌于LB液体培养基中，按