春兰与大花蕙兰杂交种原球茎分化与生根研究.docVIP

春兰与大花蕙兰杂交种原球茎分化与生根研究 　　摘 要：以春兰‘紫萼’×大花蕙兰‘日本绿’杂交种原球茎和无根幼苗为材料研究了NAA、6-BA和GA3对杂交种芽苗分化以及NAA、IBA、香蕉泥对壮苗生根的影响。结果表明：（1）在培养基中添加外源激素可促进原球茎分化，当6-BA和NAA浓度比为4～5∶1 时分化效果最好；当培养基含有较高或适宜浓度的生长素时，添加赤霉素会抑制原球茎的生长、分化；杂交种原球茎分化芽苗最适宜培养基为N6+NAA0.2 mg?L-1 +6-BA 1 mg?L-1。（2）NAA对生根率、生根数、根长影响均达极显著水平；IBA对生根率、根长影响不显著，仅对生根数有一定促进作用；香蕉泥对生根数影响不显著，但对生根率、根长影响都达极显著水平，壮苗生根最佳培养基为N6+NAA0.2 mg?L-1+ IBA0.5 mg?L-1+香蕉泥50 mg?L-1。 　　关键词：春兰；大花蕙兰；原球茎；分化；生根 　　中图分类号：S682.31 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2015.08.032 　　春兰（Cymbidium goeringii （Reichb. f.） Reichb. f.）是兰属中的小花型地生兰种类，其株型较小，叶长一般20～40 cm；花葶直立，高2～15 cm，花常单生，直径4～5 cm；花色以浅黄绿色为常见，常具宜人的清香。大花蕙兰（C. hybridum）通常是指兰属中原产于印度、缅甸、泰国、越南和我国西南部等地区的一部分附生性较强的大花种类及以这些原种为亲本获得的人工杂交种[1-2]， 其株型、花型硕大，色泽艳丽丰富，花瓣圆阔丰满，开花数目多而花期长。杂交育种是兰花育种最重要的方法，利用该方法已培育出10万多个洋兰新品种。中国兰与大花蕙兰杂交培育而成的新品种既有大花蕙兰的花大色艳的优点，又弥补了大花蕙兰无香味、株型过大、抗性较差等缺点。但其种子十分细小，种子内的胚通常发育不完全，且几乎无胚乳，在自然条件下很难萌发，现代育种多采用离体胚培养[3-6]。本试验采用多因素正交试验，从基本培养基以及外源激素种类及其浓度等方面探讨了春兰与大花蕙兰杂种原球茎分化和生根的培养基，旨在为春兰与芳香型大花蕙兰杂交育种提供基础。 　　1 材料和方法 　　1.1 杂交种原球茎分化 　　以春兰‘紫萼’×大花蕙兰‘日本绿’杂交种增殖后所得的大小相同、长势一致的原球茎为外植体，以N6为基本培养基，对NAA、6-BA和GA3进行3因素3水平的L9（33）正交试验（表1）。每处理接种30个原球茎，重复3次，各因素水平见表1。接种60 d后统计芽苗分化情况。芽苗高度大于1 cm记录为分化苗，幼苗分化率=分化成苗数/接种原球茎数×l00%。 　　1.2 杂交种壮苗生根 　　以分化的株高约2～3 cm，有2～3枚幼叶，生长健壮、长势均匀的组培苗，进行壮苗生根培养。以N6为基本培养基，分别添加NAA、IBA、香蕉泥构成L9（33）正交试验。每处理接种30株，重复3次，各因素水平见表2。待幼苗生长60 d后对其统计生根情况：生根率、平均生根数和平均根长。生根率=（生根苗数/接种苗数） × l00%，平均生根数=总根数/生根苗数，平均根长=总根长/生根苗数。 　　以上各培养基每升加入蔗糖20 g，琼脂8 g，调节pH值到5.4，121 ℃高温灭菌25 min。培养环境为温度（25士2） ℃，光照12 h?d-1，光强2 000 Lx。 　　2 结果与分析 　　2.1 原球茎分化 　　原球茎接种30 d后，开始萌发出不定芽（图1），接种60 d后（图2）对芽苗分化情况的统计见表3。对表3的统计结果利用SPSS软件进行方差分析（表4），结果表明，GA3对原球茎分化芽苗的影响达到极显著水平（P0.01），6-BA对原球茎分化影响显著（P0.05），NAA对原球茎分化影响不显著。分别对3因素进行多重比较，结果见表5。 　　对正交试验9个处理进行多重比较，结果如图3。由图3可知，C4与C5之间差异极显著，C5幼苗分化率最高，达到38.17%，C4分化率最低，仅有14.6%，表明在培养基中添加的GA3和6-BA的比例不同，对原球茎分化将产生极大的影响。C1与C5差异不显著，且分化率相差较小，表明培养基中添加NAA对原球茎分化幼苗的影响较小。 　　方差分析结果表明，影响原球茎分化的主导因素为c因素，次要因素是b因素。由表5可知，b、c因素最佳组合为b2c1，即原球茎分化效果最佳的外源激素组合为6-BA mg/L +GA30 mg?L-1。a因素3水平之间差异不显著，试验过程中本着操作方便、节省开支等原则选取分化率最高的浓度，即第2水平。因此，3种外源激素的最佳组合为a2b2c