春蚕豆茎段组织培养与植株再生研究.docVIP

春蚕豆茎段组织培养与植株再生研究 　　摘要以青海当地主栽品种青海11号的茎段为外植体,探讨了不同生长调节物质、不同糖浓度对外植体分化的影响以及外植体不同苗龄的分化能力差异,其中以添加2.0~3.0 mg/L 6-BA、0.05~0.08 mg/L NAA的培养基诱导芽的分化效果最好,且越幼嫩的外植体诱导芽分化越容易,并建立了青海11号茎段的高效再生体系。 　　关键词春蚕豆;茎段;组织培养;植株再生 　　中图分类号S643.6文献标识码A文章编号 1007-5739(2010)19-0104-01 　　 　　StudyonTissueCultureandPlantletRegenerationfromStemletofFabaBean 　　PENG Xiu-keLIU Yang 　　(Qinghai Academy of Agricultural and Forestry Sciences,Xining Qinghai 810016) 　　AbstractUsing stemlet of major cultivar(Qinghai NO.11)of faba bean, the influence of different growth regulating substances,different sugar concentration and ages on explant differentiation were studied. The culture media added 2.0~3.0 mg/L 6-BA,0.05~0.08 mg/L NAA showed the best differentiation effect,and the younger and tenderer the explant was,the easier the differentiation of inducing bud was. Then high efficient regeneration system of Qinghai NO.11 was established. 　　Key wordsspring faba bean;stemlet;tissue culture;plant regeneration 　　 　　蚕豆的组织培养研究在国外开展较早,人们已先后以茎尖、上胚轴、茎基节[1-4]、子叶节、合子胚[5]作外植体进行诱导,认为芽和根的诱导很好,以合子胚为外植体的培养获得了完全开花的再生植株。我国在这一领域的研究不多,主要是青海省农林科学院所做的一些研究,而高效率的外植体再生体系是采用基因工程改良作物的前提。本文较为系统地研究了青海主栽品种茎段的组织培养和植株再生,若在此基础上,再补充相关研究所建立的外植体再生体系即可用于蚕豆遗传转化研究。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　试验采用的春蚕豆(vicia faba L.)品种为青海11号,是青海省农林科学院作物所选育的优质、高产大粒品种。供试基本培养基为N6,添加蔗糖、琼脂。生长调节剂为6-BA、NAA。 　　1.2试验设计 　　试验设10个处理,即分别在培养基中添加0.50 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA(A)、0.05 mg/L NAA+3.0 mg/L 6-BA(B)、0.10 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA(C)、0.05 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA(D)、0.08 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA(E)、0.05 mg/L NAA+2.4 mg/L 6-BA(F)、0.08 mg/L NAA+2.4 mg/L 6-BA(G)、0.10 mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA(H)、0.06 mg/L NAA+3.0 mg/L 6-BA(I)、0.10 mg/L NAA+3.0 mg/L 6-BA(J)作为诱导分化培养基。每瓶接种4个茎段,每种培养基上接种外植体48个,8次重复。 　　1.3试验实施 　　室内盆栽植株,剪取2~3节茎段,用自来水冲洗茎段10 min,将洗净的茎段置于70%的酒精中灭菌30 s,再放入0.1%的升汞中灭菌8 min,取出后用无菌水漂洗4~5次。将消毒后的外植体切成单芽茎段,通过无菌操作,接种到培养基上。各培养基均添加3%蔗糖、1%琼脂,培养温度为(25±2) ℃,光照为3 000 lx。20 d左右继代1次,30 d后统计结果。 　　2结果与分析 　　2.1不同生长调节物质诱导外植体分化的比较 　　外植体接种到诱导分化培养基上4 d后都有幼芽的萌发,只是分化的芽数不同。不同生长调节物质组合诱导芽分化的结果统计表明,在NA