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羽衣甘蓝自交不亲与性克服探讨 　　羽衣甘蓝做为一种新型的具有很高观赏价值的花卉，在国内外市场越来越受到欢迎。由于我国栽培的羽衣甘蓝类型多为从国外引进的F1代，其后代分离现象严重，品种退化，不适合多代栽培。因此，要选育出适合在我国栽培的优良品种。花期自交不亲和的羽衣甘蓝品种可以在杂交育种中避免去雄等繁琐的工序，直接获得杂交种。而找出适合的方法克服羽衣甘蓝的自交不亲和性可以用于羽衣甘蓝亲本的自繁。 　　本试验通过对羽衣甘蓝不同品系进行自交亲和指数测定试验及克服自交不亲和性试验，选出羽衣甘蓝自交不亲和系，并找出克服其自交不亲和性的方法，为羽衣甘蓝的杂交育种和自繁留种提供了很好的方法。 　　1 材料和方法 　　1.1 植物材料及试验试剂用具 　　1.1.1 植物材料：供试植物材料为从日本引进的F1代羽衣甘蓝，品系有粉红色波浪叶系，紫红色波浪叶系。 　　1.1.2 试验试剂：氯化钠，硼酸，95%乙醇，冰醋酸，氢氧化钠，苯胺蓝，甘油，磷酸钾，磷酸二氢钾，氧化乐果。 　　1.1.3 试验用具：试剂瓶，量筒，玻璃棒，烧杯，天平，洗瓶，镊子，标签，棉绳，喷壶，棉球，载玻片，盖玻片，荧光显微镜，硫酸纸袋。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 直接采种法测定自交亲和指数试验。采用花期自交和蕾期剥蕾自交同时进行的方法，比较不同时期羽衣甘蓝的自交亲和指数。在供试验植株上选4～5条一级花序上发育良好的花和蕾进行自交授粉，保证在同等条件下进行比较。开花前的1～2天内套袋，防止外源花粉污染，开花后摘袋，选已开放的花和大蕾进行自交授粉，将不用的小蕾和花序都摘掉，保证营养供应充足。授粉之后，在该花枝上系上标签，标明日期，以及花期授粉和蕾期授粉个数，然后在花期授粉和蕾期授粉样本之间系上棉绳，区别花期授粉和蕾期授粉，最后再套袋，避免外援花粉污染。授粉后1个星期左右摘袋，保证植株充分生长发育，摘袋标准为花瓣已经脱落。授粉后1个月左右种子成熟，取种测定亲和指数。亲和指数=籽粒数/自交花（或蕾）数。当亲和指数小于1时为不亲和。 　　1.2.2 荧光显微法测定自交不亲和性试验。授粉前工序同上，在供试验植株上选5～6条一级花序上发育良好的花和蕾进行自交授粉。同样系上标签标明日期及个数，并在花期授粉样本和蕾期授粉样本之间系上棉绳以示区别，然后套袋。授粉后分别在6小时、24小时、48小时、72小时取样，用荧光显微法测定羽衣甘蓝的自交亲和性。每次取样时分别取5个花期授粉和5个蕾期授粉样本，去掉花冠和雄蕊，用酒精：醋酸（3：1）固定液固定5小时以上，从固定液中取出样品放入1个盛NNaOH溶液的试管中，60℃水浴l小时，使组织软化。倒掉NaOH溶液，用蒸馏水冲洗后，以苯胺蓝液（在0.1MK3PO4100ml中加入100mg苯胺蓝，放置12小时，使之变清）染色24小时，用荧光显微镜镜检。镜检时雌蕊置载玻片上，加l～2滴甘油，加盖玻片压平。花粉粒或萌发后的花粉管在紫光下呈明亮的黄绿色荧光。根据花粉粒在柱头上的萌发情况和花粉管在花柱组织中的生长状况判断其自交亲和性程度。 　　1.2.3 不同药剂处理克服自交不亲和实验。在确定为自交不亲和系的植株上选9条一级花序，采用化学药剂喷雾后半天内授粉的方法进行实验。在同等条件下，分别用9种不同的药剂处理进行克服不亲和实验。分别为：1.5%Nacl；3%Nacl；4.5%Nacl；6%Nacl；9%Nacl；3%Nacl+0.1%H3BO3；3%Nacl+0.2%H3BO3；6%Nacl+0.1%H3BO3；6%Nacl+0.2%H3BO3。授粉后套袋，7天左右摘袋，待角果成熟时统计角果数和籽粒数，计算出亲和指数，找出最适合的处理方法。 　　1.2.4 不同授粉时间试验。在确定为自交不亲和系的植株上选5条一级花序，分别在不同喷雾后授粉时间间隔下进行对照试验。采用的浓度为不同药剂处理试验中选出的最佳浓度。间隔时间分别为：0.5小h、1h、5h、24h、48h。以花期无处理自交和蕾期无处理自交为对照。用标签标明授粉的时间、个数以及时间间隔。授粉后套袋，7天左右摘袋，待角果成熟时统计角果数和籽粒数，计算出亲和指数，找出最适合的处理时间。 　　以上试验所用羽衣甘蓝植株在栽植后需多次追肥、除草、打药，保证试验过程顺利进行。 　　2 结果与分析 　　2.1 采种结果 　　根据采种结果计算出各品系花期和蕾期自交亲和指数，亲和指数=籽粒数/自交花（或蕾）数，由表1可知，粉红色波浪叶系，紫红色波浪叶系2个品种，蕾期自交亲和指数均大于10，而花期自交亲和指数均小于1。由此可见，这2个品种均是自交不亲和系。3个品系蕾期自交的籽粒数/角果数均大于10，花期自交的籽粒数/角果数均小于3，这说明花期自交即使结实，发育也不如蕾期自交的好，这可能是由