分子生物学试验-吉林大学生物基础国家级试验教学示范中心.DOC

分子生物学实验A（343006）实验教学大纲 01．教学单位名称：生命科学学院 02．实验中心名称：吉林大学国家级生物实验教学示范中心 03．课程名称：分子生物学实验A 04．课程代码：343006 05．课程类别：学科基础课 06．课程性质：必修 07．课程学时： 64 08．课程学分： 2 09．面向专业：生物科学、生物技术、理科实验班 10．实验课程的教学任务、要求和教学目的 10.1 教学任务： 是让学生运用已学过的知识验证一些结论、结果和现象，及综合运用已学过的理论知识设计实验或进行综合性的实验，巩固和加深对分子生物学课程中基本理论知识的理解，使学生对分子生物学方法的应用和意义有具体而全面的理解，训练学生理论知识的运用能力、实验操作技能、仪器仪表的使用能力、实验数据的处理和分析能力。 10.2 教学要求： 要求学生在实验前认真听教师讲解，认真预习，掌握实验的基本原理、主要操作步骤和注意事项。实验中操作正确，观察细致，记录认真，能及时发现、分析和解决实验中出现的问题。正确书写实验报告，并对实验结果进行分析讨论，从而将理论与实际联系起来，全面提高学生的综合素质。 10.3 教学目的： 通过本课程的教学，使学生掌握现代分子生物学研究的基本知识、理论、方法、技术和技能。通过质粒载体与目的基因双酶切，琼脂糖凝胶电泳、琼脂糖凝胶回收，质粒载体与目的基因的连接，感受态细胞的CaCl2法制备，重组DNA的转化，重组子的筛选和质粒DNA的抽提以及PCR法鉴定阳性克隆等实验过程，使学生掌握基因工程的核心内容、基本过程与实验技术，训练并培养学生的实际动手能力及发现、分析和解决问题的能力。利用分子生物学实验理论、技术与方法（含查资料获得的新知识），自己独立设计实验方案并完成填报设计实验申请书的全过程，培养学生查阅文献、手册、工具书和其它信息源的能力及各种文献整理的能力。从而促进学生对生命科学探索的兴趣和爱好、创新思维和科研素养的培养及综合素质的提高，为今后的毕业论文设计和从事专业相关领域工作奠定良好的基础。 11．学生应掌握的实验技术及实验能力 11.1掌握DNA双酶切、连接，琼脂糖凝胶电泳、琼脂糖凝胶回收、CaCl2法制备感受态细胞、重组DNA的转化和质粒抽提以及PCR法鉴定阳性克隆等实验技术和方法； 11.2掌握核酸芯片设计与制作、微阵列芯片检测与数据分析等实验技术与方法； 11.3 DNA和RNA提取技术；PCR－RFLP法鉴定基因型技术；Southern印记杂交技术；动物转基因技术的实验原理；核酸探针制备技术。 12．开设实验项目 重组人白介素-18(rhIL-18)基因工程菌的构建。主要内容包括：限制性内切酶EcoRⅠ和PstⅠ双酶切pUC18质粒和IL-18目的基因，琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶回收两个基因片段，在T4-DNA ligase 作用下将两个回收片段连接，获得重组pUC 18-IL-18；CaCl2法制备E.coli JM109感受态细胞，转化pUC 18-IL-18，用PCR法鉴定重组阳性克隆。 头发中抽提DNA并用PCR－RFLP法鉴定CYP2C9基因型。主要内容包括：从头发中抽提DNA，并用PCR扩增目的DNA片段，电泳检测后，进行限制性内切酶酶切，检测酶切位点，用PCR－RFLP法鉴定CYP2C9基因型。 蛋白质印迹分析。主要内容包括：主要内容包括：将目的蛋白进行SDS电泳，目的蛋白质转移到纤维素膜上，考马斯亮蓝染色后观察、染色结果分析。 DNA探针的制备和标记。主要内容包括：利用大肠杆菌DNA聚合酶的3’外切核酸酶活性从5’末端切除核酸，同时在 DNA聚合酶的5’聚合酶活性的催化下将dNTP添加到切口的3’末端，5’末端核苷酸的去除与3 Southern印迹法。主要内容包括：将待检测的DNA样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。通过Southern杂交判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。 RNA 的 Northern 杂交。主要内容包括： RNA分离；将RNA固定到支持物上；固相RNA与探针分子杂交；对特异结合的探针分子的图像进行检测、捕获和分析。 真核生物cDNA文库的构建和分析。主要内容包括：以生物细胞的总 mRNA 为模板，用逆转录酶合成互补的双链 cDNA ，然后接到载体上，转入到宿主后建立的基因文库就是 cDNA 文库。 电穿孔法转染哺乳动物细胞。主要内容包括：将盛有细胞和 DNA混合液的特制小容器置于电泳冲仪的正负电极之间，在 0 ℃ 聚合酶链式反应-单链构象多态性检测（PCR-SSCP）。主要内容包括：以总RNA为模板进行PCR扩增，将PCR扩增出特异性好的产物，在聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，染色后观察电泳结