冬葵子抗肿瘤蛋白诱导细胞凋亡分子机制研究-生物工程专业论文.docxVIP

目 录 中文摘要 I AbstractII 第一章 文献综述 1 1.1 天然产物简介 1 1.1.1 植物来源天然产物应用简介 1 1.1.2 冬葵子简介 2 1.2 肿瘤的发生发展概况 2 1.2.1 肿瘤发病现状 2 1.2.2 肿瘤发病的分子机理简介 5 1.3 冬葵子的抗肿瘤活性 8 1.4 本课题研究的目的和意义 8 第二章 冬葵子活性蛋白提取和分离纯化 9 2.1 实验材料 9 2.1.1 实验设备及试剂 9 2.1.2 细胞株 9 2.2 实验方法 9 2.2.1 粗蛋白提取 9 2.2.2 细胞复苏、冻存和培养 10 2.2.3 MTT 法测定细胞存活 10 2.2.4 粗蛋白纯化 11 2.2.5 SDS凝胶电泳鉴定蛋白 11 2.2.6 MTT 法检测纯蛋白活性 12 2.2.7 统计学分析 12 2.3 实验结果 12 2.3.1 冬葵子粗蛋白的制备和纯化 12 2.3.2 MSP 和 MSP1 的生物活性检测 14 2.3.3 MSP 对 DLD1 和 T24 细胞存活的影响 15 2.4 讨论 16  HYPERLINK \l _TOC_250000 第三章 MSP 诱导癌细胞发生细胞周期 G1 期阻滞 17 3.1 实验材料 17 3.1.1 实验试剂及抗体 17 3.1.2 细胞株 17 3.2 实验方法 17 3.2.1 FHC、DLD1 和 T24 细胞培养 17 3.2.2 流式细胞仪检测 FHC、DLD1 和 T24 细胞周期 18 3.2.3 DLD1 细胞总蛋白提取 18 3.2.4 Western blotting 法检测 DLD1 细胞周期相关蛋白表达水平 18 3.2.5 统计学分析 19 3.3 实验结果 19 3.3.1 MSP 能引起 DLD1 和 T24 细胞周期发生 G1 期阻滞 19 3.3.2 MSP 对 DLD1 细胞周期 G1 期相关蛋白表达的影响 20 3.4 讨论 20 第四章 MSP 通过激活凋亡途径诱导肿瘤细胞凋亡 21 4.1 实验材料 21 4.1.1 实验试剂及抗体 21 4.1.2 细胞株 21 4.2 实验方法 22 4.2.1 FHC、DLD1 和 T24 细胞培养 22 4.2.2 流式细胞仪检测 FHC、DLD1 和 T24 细胞凋亡 22 4.2.3 DAPI 染色检测 FHC、DLD1 和 T24 细胞凋亡 22 4.2.4 JC-1 染色检测 FHC、DLD1 和 T24 细胞线粒体膜电位变化 22 4.2.5 Western Blotting 检测 DLD1 细胞内外源性凋亡相关蛋白表达 23 4.2.6 统计学分析 23 4.3 实验结果 23 4.3.1 MSP 能诱导 DLD1 和 T24 细胞凋亡 23 4.3.2 MSP 对 DLD1 细胞外源性凋亡相关蛋白表达的影响 24 4.3.3 MSP 对 DLD1 和 T24 细胞膜电位的影响 25 4.3.4 MSP 对 DLD1 细胞内源性凋亡相关蛋白表达的影响 25 4.4 讨论 26 结论 27 参考文献 28 附录 1 英文缩略语表 33 附录 2 主要试剂配方 34 附录 3 实验主要仪器设备 35 攻读学位期间取得的研究成果 36 致 谢 37 个人简况及联系方式 38 承 诺 书 39 学位论文使用授权说明 40   Contents Chinese abstract I AbstractII Chapter 1 Review 1 Introduction of natural products 1 Introduction of plant source natural products 1 Introduction of malva seed 2 Overview of tumor development 2 The current situation of tumor development 2 The molecular mechanismof anti-tumor 5 The antitumor activity of malva seed 8 Purpose and significance of this research 8 Chapter 2 Extraction and purification of malva seed protein 9 Materials 9 Equipments and reagents 9 Cell lines 9 Methods 9 Extract