第九章 层析法课件.ppt

第九章 层 析 法;9.1 概述;层析分离精度高、设备简单、操作方便。 它是获得高纯度产物最有效的技术。;一．层析中的基本概念及其分类 ;互不相溶的两相分别称为固定相和流动相。 固定相可以是固体或者是包埋在惰性固体中的液体，而流动相可以是气体(气相色谱，GC)或液体(液相色谱，LC)，这取决于两相物理性质的结合，色谱过程有气-液、气-固、液-液、液-固色谱。 ;固相的阻滞作用是由不同的机理产生的，其中包括相的变化、相的分配、在溶液中的分子筛效应或电场作用。 相变化是指溶质从液相传递到固相，如吸附；相分配是指溶质从一个液相迁移到另一个液相，溶质始终保持在液相中。;按照层析过程的机制，层析技术又可进一步分类。;二．层析展开技术;层析过程的关键是色谱的展开，具体方法有以下三种： ;1．洗脱分析法 ;洗脱分析法能使各组分分层且分离完全，层与层间隔着一层溶剂。 如果溶质迁移速率不同，它们将以分离带的形式从柱中排出。;将混合物溶液连续通过色谱柱，只有吸附力最弱的组分以纯品状态最先自柱中流出，其他各组分都不能达到分离。色谱图呈阶梯式，在分析吸附平衡和确定等温线时很有用。;利用一种吸附力比各被吸附组分都强的物质来洗脱，这种物质称为顶替剂。 此法处理量较大，且各组分分层清楚，但层与层相连，故不能将组分完全分离。;;层析过程中，溶质在固定相和移动相之间存在着一个动力学分配平衡，可用分配系数Kd来表示，其定义是溶质在固定相中的浓度q与移动相中浓度c之比： （9-1） ;对于每个溶质，分配系数Kd值反映了它消耗在固定相上的时间，也反映了它在柱中的停留程度。;描述溶质的层析行为的参数：;;;;;;;;;9.2 层析分离过程理论;2. 色层的末端弥散应保证减至最低程度，从而使两个连续色带的重叠范围达到最小限度。;层析分离的理论;一．塔板理论;大多数塔板理论模型所共有的假设：;;;实际上，层析法是一个动态过程，在柱内任何一点上都不会达到平衡，所以色谱峰或色带会扩展和拖尾而不会陡峭。 它与平衡的偏离程度取决于相的物性，也取决于移动相沿柱方向的流动状况。;;;;从方程式中可知，应存在某个流速使HETP最小而使柱效率最优。 从图中可见，最佳操作速度Uopt＝(B/C)1/2，此时层析柱的理论板数最大，分离效果最好。 ;在液相层析分离时，一般分子扩散的影响常忽略不计，即A值近似为零。 为提高分离效果，可采用降低流速u或减小固定相粒径即C值来提高理论板数目，降低HEPT。;减小粒径的办法可同时保证分离操作的高速度和高精度，这就是高效液相色谱（HPLC）分离的理论基础。 HPLC的固定相不仅粒径小，而且扩散路程短，很短的层析柱就具有很大的理论板数，对高速度、高精度的分析和分离非常有利。;二．层析的连续描述;1．平衡模型;2．速率模型;对于放大和操作条件的最优化，数学模型是必需的，它能比简单的描述更接近事实，因此，通常从非常简单的模型着手，然后逐步使其复杂化，从而实现对问题的了解。;微分模型的预测能力优于塔板理论模型，然而微分模型的复杂性又促使人们重新回到塔板理论模型。 在设计层析试验步骤时，改进选择性和优化操作参数是放大操作的基础。 ;9.3 层析的放大;一．提高处理负荷的简单放大;如果在柱长进一步增加后，层析效果并不引起任何显著的改善，而耗材却增加，则为了扩大生产如V＝Zv，可采用与最初试验同样长度和直径的Z根层析柱进行并联。组装所有的Z根柱到一根柱中，它的横截面积为Z根柱横截面积的总和。 这样，为了处理较多的负荷V＝Zv而放大层析分离柱，只是成比例地增加柱的直径问题，乘上一个根号Z因子，就可得到。;二．按塔板理论模型放大;增加移动速度产生的影响可通过增加颗粒直径来解决。然而，增加颗粒的尺寸，柱的分辨率和分离效率会降低一些。 这些负面效应，可以通过柱长的微小增加来弥补，但是，由于静压力和床的载重增加，也会引起压力降和床的可压缩性增加，这取决于颗粒的密度。 ;在放大时，增加柱的直径，也存在一些复杂的有关问题。 一方面，直径增大，压缩性增加，器壁的机械支撑已不起作用了，这样，对于相同的压力降，在大柱中流速会有所下降； 另一方面，流体力学更为复杂，并且由于径向速度分布造成严重偏离塞式流的结果和在填充上的不均匀性使色层带的扩展增加并影响保留时间的计算。 所以大柱填充时，要求有高度的专业技术和熟练的操作人员。 ;9.4 不同分离机制的层析法简介; 将吸附剂填装在玻璃或不锈钢管中，构成层析柱，层析时欲分离的样品自柱顶加入，当样品溶液全部流入吸附层析柱后，再加入溶剂冲洗。;在洗脱过程中，柱内不断地发生解吸、吸附，再解吸、再吸附的过程。即被吸附的物质被溶剂解吸而随溶剂向下移动，又