第04章药物定量分析与分析方法验证-2013年课件.ppt

外标一点法 被测成分浓度与其峰面积成正比关系 要求供试液与对照液浓度相近 = A供 A对 C供 Ｃ对 样品 C供= C对×A供 A对 对照 2.标准曲线法 绘制浓度－峰面积(峰高)标准曲线； 拟合回归方程并计算相关系数r； A = aC + b 测定供试品峰面积(峰高)，带入方程，求出浓度。 ▲选择适宜的物质作为内标物，以待测组分和内标物的峰高比或峰面积比求算试样含量的方法称为内标法。 ▲校正因子（f ） 其含义为：内标物峰面积与其浓度之比（As/Cs）是对照品峰面积与其浓度之比（AR/CR）的多少倍。 3.内标法 对照+内标 样品+内标 样品 内标 对照 内标 校正因子 f =(A内/ C内)/(A对/C对) 黄体酮的含量测定 内标溶液的制备：取己烯雌酚25.0mg，置于25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。 测定：取黄体酮对照品25.6mg，置于25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液与内标溶液各5mL，置于25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。取5μL注入液相色谱仪，记录色谱图，测得黄体酮峰面积为537808，己烯雌酚峰面积503246； 另取样品24.6mg，按同法测定。记录色谱图，测得黄体酮峰面积为519397，己烯雌酚峰面积497048，求黄体酮的百分含量。（101.8%） 例 色谱柱：填充柱和毛细管柱 检测器： 氢火焰离子化检测器（FID） 电子捕获检测器（ECD） 气相色谱法（GC） 色谱系统 系统适用性试验：同HPLC法 含量测定： 以内标法为主，操作及计算方法同HPLC法 第二节 药品质量标准分析方法验证 一、目的 证明所用的分析方法适合相应的检验要求。 （一）起草新药质量标准时 （二）改变生产工艺时 改变制剂处方 修订原分析方法时 二、用途 三、需验证的分析项目 鉴别 检查：杂质定量或限度检查 含量测定：原料药或制剂中有效成分及制剂中其他成分（如降解产物、防腐剂等）。 四、验证指标 准确度 精密度 专属性 检测限 定量限 线性 范围 耐用性 √ （一）准确度 测定结果与真实值或参考值接近程度 用百分回收率表示。 测定回收率R（recovery）的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。 原料药：用已知浓度的对照品测定，或将本法测定结果与另一已建立准确度的方法的测定结果相比。 1. 含量测定方法的准确度 制剂：采用在空白辅料中加入原料药对照品的方法。 如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或与另一个已建立准确度的方法比较结果。 2. 杂质定量测定的准确度 向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较。 数据要求： 规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。 （二）精密度 同一均匀样品，经多次取样测定，所得结果之间的接近程度。 标准偏差 相对标准偏差 *重复性 同人、仪器、时间 *中间精密度 同室，但不同人、仪器、时间 *重现性 不同地方协同检验 （三）专属性（选择性） 在有其他成分（杂质、降解产物、辅料等）可能存在时，该分析方法对待测组分准确而专属的测定能力。 鉴别反应、杂质检查、含量测定方法均应考察。 鉴别反应：用不含被测成分的供试品，应呈负反应。 含量测定和杂质检查： 试样中加入杂质或辅料，考察是否干扰。 加速破坏试验（强光照射、高温、高湿、酸碱水解、氧化），研究可能的降解产物和降解途径，检查色谱分离情况。 （四）检测限LOD 样品中待测组分能被检测出的最低量。 是限度试验参数，无需定量测定。常用%、ppm、ppb表示。 非仪器分析法-目视法 能观察到实验现象的最低浓度为检测限 仪器分析法 色谱法：按信噪比（S/N）3:1或2:1时的相应浓度或进样量为检测限。 分光光度法：用空白样品进行分析，求得方法背景响应值的标准偏差S空。 （五）定量限 LOQ 样品中被测组分能被定量测定的最低量（应达到一定的准确度和精密度）。 常用%、ppm、ppb表